Summary

Cultura organotípicos de retina de un conejo adulto

Published: April 29, 2007
doi:

Summary

En este artículo se demuestra que la disección y la incubación de la retina de un conejo y de partículas mediada por la transferencia de genes de plásmidos que codifican las buenas prácticas agrarias o de una variedad de marcadores subcelular en las células ganglionares de la retina.

Abstract

Sistemas funcionales organotípicos cultura de los tejidos neuronales son herramientas importantes en la investigación neurobiológica. Idealmente, este sistema debe ser compatible con técnicas de imagen, la manipulación genética, y el registro electrofisiológico. Aquí presentamos un tejido simple interfase sistema de cultivo de retina de un conejo adulto, que no requiere equipo especializado y muy poco mantenimiento. Nos demuestran que la disección y la incubación de retina de un conejo y de partículas mediada por la transferencia de genes de plásmidos que codifican las buenas prácticas agrarias o de una variedad de marcadores subcelular en células ganglionares de la retina. Retinas de conejo cultivadas de esta manera puede mantenerse vivo durante un máximo de 6 días con muy pocos cambios de la estructura anatómica general o la morfología de cada uno de ganglio y las células amacrinas.

Protocol

Hacer balas pistola de genes (GOLD) Hacer 100X PVP (0.5mg/ml) en EtOH al 100%. Pesar 30 mg de 1,6 micras de oro BioRad microportadores y colocarlo en un tubo eppendorf de 1,5 ml. Calcular la cantidad de plásmido necesarios para obtener una concentración de 0,5-3 g de oro plásmido / mg, y el lugar del plásmido en el tubo con la microportadores oro. Combine varios plásmidos, si es necesario. Aumentar el volumen de plásmido a 100 ml con agua destilada. Añadir 100 ml …

Discussion

1. ¿Qué puedo hacer con este método?

  • Ver claramente la morfología celular.
  • Las células de la etiqueta de registro de los mismos.
  • Sobreexpresan proteínas, como PSD95, sino también de otras proteínas que modulan la respuesta de la célula, por ejemplo, canales iónicos, receptores.
  • Expresar RNAs inhibidores.

2. ¿Cuánto tiempo puedo mantener retina adulta?

  • Cuatro días no es problema para conejo adulto. Seis días después, las células se ven "mal", es d…

References

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Citer Cet Article
Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina. J. Vis. Exp. (3), e190, doi:10.3791/190 (2007).

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