Summary

Organotypischen Kultur der Adult Kaninchen Retina

Published: April 29, 2007
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Summary

Dieser Artikel zeigt die Präparation und Inkubation von Kaninchen-Netzhaut und Partikel-vermittelte Gentransfer von Plasmiden GFP oder eine Vielzahl von subzellulären Marker in retinalen Ganglienzellen.

Abstract

Organotypischen Kultur von funktionellen neuronalen Gewebe sind wichtige Werkzeuge in der neurobiologischen Forschung. Idealerweise sollte ein solches System kompatibel sein mit bildgebenden Verfahren, genetische Manipulation und elektrophysiologische Ableitung. Hier präsentieren wir Ihnen eine einfache Interphase Gewebekultursystem für erwachsene Kaninchen Netzhaut, die keine spezielle Ausrüstung und nur sehr wenig Wartung benötigt. Wir zeigen die Präparation und Inkubation von Kaninchen-Netzhaut und Partikel-vermittelte Gentransfer von Plasmiden GFP oder eine Vielzahl von subzellulären Marker in retinalen Ganglienzellen. Kaninchen Netzhaut kultivierten diese Weise am Leben erhalten für bis zu 6 Tage mit sehr wenig Veränderungen der allgemeinen anatomischen Struktur oder die Morphologie der einzelnen Ganglien-und Amakrinzellen werden.

Protocol

Herstellung Gen-Kanone Kugeln (GOLD) Machen 100X PVP (0,5-Promillegrenze) in 100% EtOH. Abwiegen 30mg BioRad 1,6 Micron Mikroträger gold und legen Sie sie in ein 1,5 ml Eppendorf-Röhrchen. Berechnen Sie die Menge an Plasmid benötigt, um eine Konzentration von 0,5-3 ug Plasmid / mg Gold zu geben, und statt das Plasmid in das Rohr mit dem Gold Mikroträger. Kombinieren Sie mehrere Plasmide, wenn nötig. Bringt Volumen von Plasmid zu 100 ul mit destilliertem Wasser. 100 …

Discussion

1. Was kann ich mit dieser Methode zu tun?

  • Siehe Zellmorphologie deutlich.
  • Label-Zellen, von ihnen zu erfassen.
  • Überexprimieren Proteine, wie PSD95, sondern auch andere Proteine, die die Zelle die Reaktion modulieren, zB Ionenkanäle, Rezeptoren.
  • Express inhibitorischen RNAs.

2. Wie lange kann ich erwachsenen Netzhaut?

  • 4 Tage ist kein Problem für erwachsene Kaninchen. Nach sechs Tagen wurden die Zellen aussehen "krank", dh die Axone einfahren, sehen Sie Anschw…

References

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Citer Cet Article
Lye, M. H., Jakobs, T. C., Masland, R. H., Koizumi, A. Organotypic Culture of Adult Rabbit Retina. J. Vis. Exp. (3), e190, doi:10.3791/190 (2007).

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