Summary

자기 변조 Biosensing 시스템을 사용하여 생물 학적 Assays의 급속한 동차 검색

Published: June 13, 2010
doi:

Summary

자기 변조 biosensing 시스템은 빠르게, sensitively 단순히 같은 DNA 분자와 단백질과 같은 생물 학적 assays를 감지하는 활용됩니다.

Abstract

자기 변조 biosensing 시스템 (MMB) [1,2] 빠르게하고 세척 또는 분리 단계없이 낮은 농도에서 homogeneously 감지 생물 학적 대상으로하고 있습니다. IL – 8 목표는 현재의 때, 'sandwich' 기반 분석은 IL – 8 대상과 biotinylated IL – 8 항체 결합을 통해 형광 단백질을 streptavidin하는 IL – 8 캡처 항체와 자기 구슬을 첨부. 자석 구슬은 두 개의 전자 기둥을 통해 교류 자기장 기울기를 적용하여 oscillatory 모션으로 였는데 있습니다. 자석 구슬에 연결된 형광 단백질은 직교 레이저 빔을 동기 검출을 사용 복조된하는 정기 형광 신호를 생산에서 퇴원 감지 영역과 운동으로 응축됩니다. 자기 변조 biosensing 시스템은 이전에 비 구조 이바라키 바이러스 단백질 3 (NS3) 보완 DNA (cDNA) [2]의 코드 시퀀스를 검색하는 데 사용되었다. 입자의 외부 조작 및 응축이 작품 시연되는 기술은 다른 응용 프로그램, 자기 (磁 气) – 결합 약물의 예를 들어 전달에 사용할 수 있습니다<em>에 – 생체내</em> 또는 대비를 강화<em>에 – 생체내</em> 이미징 응용 프로그램.

Protocol

IL – 8 검정 : 각각의 농도의 분석 완충액 100 μl 최종 볼륨의 반응 혼합물은 다음 네 가지 구성 요소가 포함되어 있습니다. 100 구슬 / μl 최종 농도 1 nano-gram/μl 최종 농도에 biotinylated IL – 8 항체 2 μl, 20 nano-gram/μl 최종 농도에 streptavidin 형광 단백질의 1 μl에서 캡처 항체와 자석 구슬 10 μl 0.48 pico-gram/μl에서 IL – 8 대상의 1 μl. 구성 요소 분석 버퍼를 하나씩 추가하고 30 분 흔들리고 있습니다. </…

Discussion

요약, 우리는 MMB 시스템이 낮은 농도 (0.5 피코 – g가 [3,4] 바이오 플렉스 정밀 프로 시토킨 assays의 검출 한계입니다)에서 IL – 8 대상의 존재를 감지하는 데 사용할 수있는 것으로 나타났다. 시스템의 기능은 IL – 8에 국한되지 않으며 다른 단백질을 탐지하는 데 사용할 수 있습니다. MMB 시스템의 장점은 빠른 속도로 및 분리 또는 세척 단계없이 목표물을 감지하는 능력입니다. 따라서, 그것은 검색 프?…

Acknowledgements

이 작품은 일부 Ishaya 호로비츠 기금에 의해 지원되었다.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Bio-Plex Pro Human Cytokine IL-8 set   Bio-Rad 171-B5008M  
Recombinant human IL-8 target   Thermo Scientific R202625  
Biotinylated monoclonal mouse anti human IL-8 antibody G265-8   BD Biosciences 554718  
Streptavidin coupled fluorescent protein   Bio-Rad Streptavidin PE  

References

  1. Danielli, A., Arie, A., Porat, N., Ehrlich, M. Detection of fluorescent-labeled probes at sub-picomolar concentrations by magnetic modulation. Optics Express. 16, 19253-19259 (2008).
  2. Danielli, A., Porat, N., Arie, A., Ehrlich, M. Rapid homogenous detection of the Ibaraki virus NS3 cDNA at pico-molar concentrations by magnetic modulation. Biosensors and Bioelectronics. 25, 858-863 (2009).
  3. . . Bio-Rad “Human angiogenesis assay panel”. , .
  4. . Instruction Manual. Bio-Plex Precision Pro Cytokine Assay. , .
check_url/fr/1935?article_type=t

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Citer Cet Article
Danielli, A., Porat, N., Ehrlich, M., Arie, A. Rapid Homogeneous Detection of Biological Assays Using Magnetic Modulation Biosensing System. J. Vis. Exp. (40), e1935, doi:10.3791/1935 (2010).

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