In situ kwantificering van beta-celmassa in Muizen
Summary
Het volgende protocol schetst het proces van het pancreas dissectie voor virtuele slice beeldvorming, en de daaropvolgende kwantificering van alle GFP-gelabelde beta-cellen in de gehele alvleesklier.
Abstract
Traceren veranderingen van specifieke cel populaties in gezondheid en ziekte is een belangrijk doel van het biomedisch onderzoek. Het proces van de controle pancreatische beta-cel-proliferatie en eilandje groei vormt een bijzondere uitdaging. We hebben een methode ontwikkeld om de distributie van beta-cellen vast te leggen in het intacte pancreas van transgene muizen met fluorescentie-gelabeld beta-cellen met een macro geschreven voor ImageJ (rsb.info.nih.gov / ij /). Na de pancreas dissectie en weefsel clearing wordt de hele alvleesklier vastgelegd als een virtuele slice, waarna de GFP-gelabelde beta-cellen worden onderzocht. De analyse omvat de kwantificering van de totale bèta-cel gebied, eilandje aantal en de grootte distributie met verwijzing naar specifieke parameters en locaties voor elk eilandje en voor kleine clusters van beta-cellen. De gehele verdeling van de eilandjes kunnen worden uitgezet in drie dimensies, en de informatie van de distributie op de grootte en vorm van elk eilandje staat een kwantitatieve en kwalitatieve vergelijking van de veranderingen in de totale beta-cel gebied in een oogopslag.
Protocol
Discussion
De analyse van Virtual Slice beelden van eilandjes en beta-cel clusters in de intacte alvleesklier zorgt voor een grote weergave van de gehele verdeling van de eilandjes. Ontwikkelingen en veranderingen in het totaal eilandje verdeling over de tijd kan dus worden bestudeerd en vergeleken. Zo'n voorbeeld wordt gedemonstreerd in onze analyse van de eilandjes van Langerhans formatie (1). Een uitgebreide analyse van neonatale muizen pancreata op verschillende tijdstippen (P1-P21) heeft aangetoond dat eilandjes worden ge…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De studie wordt ondersteund door US Public Health Service Grant DK-081527, DK-072473 en DK-20595 aan de Universiteit van Chicago Diabetes Research and Training Center (Animal Models Core), en een geschenk van de Kovler Family Foundation.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Forceps | Miltex | |||
| Scissors | F.S.T | 14001-13 | 01n2 | |
| Scissors | F.S.T | 14072-10 | 02s5 | |
| Large glass slide | Electron Microscopy Sciences | 71862-01 | 75x51x1.2mm | |
| Large cover glass | Ted Pella, Inc | 260462 | 50x75mm | |
| Glass Slide | Fisher Scientific | 12-550-15 | 25x75x1.0mm | |
| Cover glass | Fisher Scientific | 12-458-5M | 75x25mm | |
| Cover glass | Erie Scientific | 25mm circle | ||
| Fluorescent microscope | Olympus IX-81 | |||
| Dissection microscope | Olympus SZX12 | |||
| Stereo Investigator | MicroBrightField | |||
| MIP-GFP mice | Jackson Laboratory |
References
- Miller, K., Kim, A., Kilimnik, G., Moka, U., Jo, J., Periwal, V., Hara, M. Islet formation during the neonatal development in mice. PloS One. 4, E7739-E7739 (2009).
- Kilimnik, G., Kim, A., Jo, J., Miller, K., Hara, M. Quantification of pancreatic islet distribution in situ in mice. Am J Physiol Endocrinol Metab. 297, E1331-E1338 (2009).
- Hara, M., Wang, X., Kawamura, T., Bindokas, V. P., Dizon, R. F., Alcoser, S. Y., Magnuson, M. A., Bell, G. I. Transgenic mice with green fluorescent protein-labeled pancreatic beta -cells. Am J Physiol Endocrinol Metab. 284, E177-E183 (2003).
- Hara, M., Dizon, R. F., Glick, B. S., Lee, C. S., Kaestner, K. H., Piston, D. W., Bindokas, V. P. Imaging pancreatic beta-cells in the intact pancreas. Am J Physiol Endocrinol Metab. 290, E1041-E1047 (2006).
