FITC-Dextran Feeding: En metode for å kvantifisere intestinal permeabilitet i C. elegans

Abstract

Kilde: Le, T. A. N., et al. Måling av effekten av bakterier og kjemikalier på tarmpermeabiliteten av Caenorhabditis elegans. J. Vis. Utt. (2019). 

Denne videoen introduserer en metode for å visualisere og måle integriteten til C. elegans tarm lumen ved å mate ormer FITC-merket dextran.  Eksempelprotokollen viser analysen som er gjort med 3,3′-diindolylmethane (DIM)-behandlede og patogenfôrede ormer.

Protocol

Denne protokollen er et utdrag fra Le et al, Måle effekten av bakterier og kjemikalier på intestinal permeabilitet av Caenorhabditis elegans,J. Vis. Exp. (2019). Forberedelse av NGM-plater for testing av effekten av et kjemikalie (DIM) på intestinal permeabili…

Representative Results

Figur 1: Effekten av DIM på intestinal permeabilitet av C. elegans matet P. aeruginosa. Mikroskopi bilder av ormer fra (A) E. coli OP50 uten FITC-dextran fôring, (B) E. coli med FITC-dextran fôring, (C) P. aeruginosa PAO1 med FITC-dextra…

Materials

3,3’-diindolylmethane	Sigma	D9568
90×15 mm Petri dishes	SPL Life Sciences, South Korea	10090
Bactor Agar	Beckton Dickinson	REF. 214010
Formaldehyde solution	Sigma	F1635
Caenorhabditis elegans N2	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)		Wild type
Cholesterol	Sigma	C3045
Costa Assay Plate, 96 Well Black With Clear Flat Bottom Non-treated, No Lid Polystyrene	Corning Incorporated	REF. 3631
Dimethyl sulfoxide	Sigma	D2650
Escherichia coli OP50	Caenorhabditis Genetics Center (CGC)
Fluorescein isothiocyanate – dextran	Sigma	FD10S
Harmony software	PerkinElmer		verson 3.5
Magnesium sulfate heptahydrate	Fisher Bioreagents	BP2213-1
Fluoromount aqueous mounting medium	Sigma	F4680
Operetta CLS High-Content Analysis System	PerkinElmer	HH16000000
Peptone	Merck	EMD 1.07213.1000
Pseudomonas aeruginosa PA01	Korean Collection for Type Culture	KCTC NO. 1637
Sodium Chloride	Fisher Bioreagents	BP358-1
Stereo Microscope	Nikon, Japan	SMZ800N