Single-molecule beeldvorming van de nucleaire transporten
Summary
Enkel molecuul microscopie Approach die nieuwe inzichten naar nucleaire transport.
Abstract
Het nut van single molecule fluorescentie microscopie aanpak is bewezen te zijn van een grote maken in het begrijpen van biologische reacties in het afgelopen decennium. Het onderzoek naar moleculaire interacties met een hoge temporele en ruimtelijke resolutie diep in de cellen is gebleven uitdagend door de inherent zwakke signalen die voortvloeien uit de individuele moleculen. Recente werken van Yang et al.. aangetoond dat smalle veld epifluorescentie microscopie visualisatie van nucleocytoplasmic vervoer kan op de single molecule-niveau. Door de een-molecuul benadering, belangrijk kinetiek, zoals nucleaire transport tijd en efficiëntie, voor signaal-afhankelijke en onafhankelijke lading moleculen zijn verkregen. Hier hebben we beschreven een protocol voor de methodologische aanpak met een verbeterde spatiotemporele resolutie van 0,4 ms en 12 nm. De verbeterde resolutie konden we voorbijgaande actief transport en passieve diffusie gebeurtenissen vast te leggen door middel van de nucleaire porie complexen (NPC) in semi-intacte cellen. We verwachten dat deze methode te gebruiken in het ontrafelen van andere bindende en-handel gebeurtenissen binnen cellen.
Protocol
Discussion
Zorg moet worden genomen om een goede colocalization van NE en enkele moleculen te verzekeren tijdens het experiment. Het is ook belangrijk te zorgen voor een hoge signaal-ruisverhouding, vooral wanneer het signaal laag is als gevolg van slechte etikettering of fotobleken. Lokalisatie precisie wordt beperkt door de ruis (als gevolg van out-of-focus fluorescentie, CCD uitlezing lawaai, donkere huidige en andere factoren).
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dit project werd ondersteund door de Research Capacity Enhancement Grant (Bowling Green State University).
References
- Ma, J., Yang, W. Single Molecule Snapshots of Three-Dimensional Distribution of Transient Interactions in Nuclear Pore Complex. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. , (2010).
- Sarma, A., Goryaynov, A., Yang, W. Single Molecule Imaging of the Calcium-Regulated Nuclear Pore Permeability. , .
- Yang, W., Musser, M. S. Visualizing single molecules transiting through nuclear pore complexes using narrow-field epifluorescence microscopy. Methods. 39, 316-328 (2006).
- Yang, W., Gelles, J., Musser, M. S. Imaging of single-molecule translocation through nuclear pore complexes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 101, 12887-12892 (2004).
