Способы получения инъекционный гель матрицу из decellularized ткани и инъекционных его в крысу миокарда<em> В естественных условиях</em> Описаны.
Этот протокол предоставляет методы для подготовки инъекционной внеклеточного матрикса (ECM), гель для инфаркта приложений тканевой инженерии. Короче говоря, decellularized ткани лиофилизированный, измельчают, ферментативно переваривается, а затем привел к физиологическим рН. Лиофилизации удаляет все содержание воды из тканей, в результате чего сухих ECM, которые могут быть земли в мелкий порошок с небольшим заводом. После фрезерования, порошок ECM переваривается пепсином в форме инъекционных матрицы. После корректировки рН 7,4, жидкий материал матрицы может быть введен в миокарде. Результаты предыдущих анализов характеристик показали, что матрица гели производятся из decellularized перикарда и ткани миокарда сохранить собственные компоненты ECM, включая разнообразные белки, пептиды и гликозаминогликанов. При использовании этого материала для тканевой инженерии, в естественных условиях характеристика особенно полезна, здесь метода для проведения очной инъекции в левого желудочка (ЛЖ) свободной стенки представлена как средство анализа принимающей ответ на матрице геля в маленькая модель животного. Доступ к грудной полости достигается через диафрагму и инъекция сделана чуть выше вершины в стене LV бесплатно. Биологически производных лесов могут быть визуализированы биотин-маркировки до инъекции, а затем окрашивание срезов ткани с пероксидазой хрена, конъюгированных neutravidin и визуализации с помощью диаминобензидина (DAB) окрашивания. Анализ области инъекции может быть сделано с гистологическим и иммуногистохимического окрашивания. Таким образом, ранее рассмотрены перикарда и инфаркта гели матрицы были показаны формы волокнистых, пористых сетей и способствовать образованию судно в области инъекции.
Этот метод позволяет поколение биологически получены, инъекционные лесов для инфаркта тканевой инженерии. Хотя эти методы были первоначально разработаны для изготовления и в естественных условиях тестирования инфаркт гель матрицы и представлена здесь с перикарда гель матри…
The authors have nothing to disclose.
Работа выполнена при частичной поддержке Нового Новатор NIH директора премии программе, часть НИЗ для медицинских исследований, через грант номер 1-DP2-OD004309-01. СБС-N. хотел бы поблагодарить NSF для стипендий исследований.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Reagents: | ||||
Pepsin | Sigma-Aldrich | p6887-1G | Lyophilized | |
Biotin | Thermo Scientific | 21217 | ||
Neutravidin-HRP | Thomas Scientific | 21130 | ||
Equipment: | ||||
Wiley Mini Mill | Thomas Scientific | 3383L10 | ||
Labconco Lyophilizer | Labconco, Inc | 7670520 | ||
Surgical supplies: | ||||
Betadine | Purdue Products, L.P. | 67618-154-16 | ||
Lactated Ringers Solution | MWI | 003966 | ||
KY Jelly | MWI | 28658 | ||
Lidocaine, 2% | MWI | 17767 | ||
Buprenorphine hydrochloride | Reckitt Benckiser Healthcare (UK) Ltd. | 12496-0757-1 | ||
Artificial tear ointment | Fisher | NC9860843 | ||
Triple antibiotic ointment | Fisher | 19082795 | ||
Isoflurane | MWI | 60307-120-25 | ||
Otoscope | MWI | 008699 | ||
Stop cock | MWI | 006245 | ||
3-0 Vicrile suture | MWI | J327H | ||
5-0 Proline suture | MWI | s-1173 | ||
Reverse cutting (RC) needle | Ethicon | 8684G | ||
Microhemostats | Fine Science Tools | 13013-14 | ||
Rat tooth microforceps | Fine Science Tools | 11084-07 | ||
No. 10 scalpel | Fine Science Tools | 10110-01 | ||
Blunt scissors | Fine Science Tools | 14108-09 | ||
Sharp, curved scissors | Fine Science Tools | 14085-08 | ||
Large, serrated forceps | Fine Science Tools | 1106-12 | ||
PE160 suction tubing | BD | 427430 | ||
Clippers | MWI | 21608 | ||
Skin staples/stapler | Ethicon | PRR35 | ||
General supplies: | ||||
Stir plates | ||||
0.1 M HCl | ||||
1 M NaOH | ||||
10x PBS | ||||
1x PBS | ||||
70% Ethanol | ||||
0.1 mL syringes | ||||
10 mL syringe | ||||
Q-tips | ||||
Surgical glue | ||||
Surgical drape | ||||
Towel clamps | ||||
Small hand-held vacuum |