抗原特异性在体内使用CFSE标记的靶细胞的杀伤含量
Summary
许多感染引起强烈的CTL反应，但偶尔，响应细胞的数量不关联控制病原体<sup> 1</sup>。 CTL的质量的措施之一是他们杀了专门的能力<sup> 2</sup>。 CFSE标签的靶细胞，可用于研究这种CTL反应质量<em>在体内</em<sup> 3,4</sup>。
Abstract
羧基荧光素二醋酸琥珀酰亚胺酯（CFSE）可用于轻松快捷地标签为利息细胞在体内的调查人口。这种标签经典被用来研究细胞增殖和迁移。在这里介绍的方法，我们已经缩短继转移，寻找生存和杀害的抗原表位的具体CFSE标记的靶细胞4-6后的时间表。一个CD8 + T细胞克隆特异性杀伤水平可以表明质量的响应，其数量可能会误导。特异性CD8 + T细胞可以成为与细胞因子的产生和杀害7,8下降随时间的功能用尽。此外，某些CD8 + T细胞克隆可能不杀以及其他不同的TCR特异性9。有效的细胞免疫（CMI）的，必须确定抗原产生的反应性T细胞不仅数量充足，而且功能强大的反应性T细胞。在这里，我们评估的两个肽特异性T细胞克隆BALB / c小鼠的特异性杀伤细胞％。
Protocol
Discussion
此法可修改进行调查，包括克隆扩增细胞的增殖能力，因为CFSE划分较为平等的后代 10,11 。它也可以使用CFSE标签探讨细胞迁移6,12的，虽然也有其他细胞的跟踪方法，可能更合适，这取决于你的假设，例如四聚体和生物发光13，这也可能与CFSE标签相结合，。
它重要的是要注意入流式细胞仪上的多渠道，CFSE出血，所以如果你想表面标记染色，PeCy7将是一?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我想感谢我介绍了免疫分析和鼠标处理比安卡Mothé，Oseroff卡拉和玛丽 – 法国DelGuercio。在GA的分配器实验室工作的经费由美国国立卫生研究院授予1 RO1 – AI – 073558，GLRCE授予1 – U54 – AI – 057153和Bard美3829 – 06。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 1 mm glass beads | Biospec Products | 11079110 | ||
| 70 μm cell strainer | BD Falcon | 352350 | ||
| 96-well plate | Costar | 3799 | ||
| Adjulite Incomplete Freund’s Adjuvant | Pacific Immunology | n/a | ||
| DMSO | Sigma | D-5879 | ||
| FBS | GIBCO | 16000-077 | ||
| FC 500 Flow Cytometer | Beckman Coulter | n/a | ||
| Kontes glass tissue grinder | Kontes | 885300-0015 | ||
| Mini Beadbeater | Biospec Products | n/a | ||
| Needle | B-D | 305175 | ||
| Parafilm “M” | Pechiney Plastic Packaging | PM992 | ||
| Paraformaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 157-8 | ||
| PBS | GIBCO | 10010-023 | ||
| PharmLyse lysing reagent | BD Biosciences | 555899 | ||
| RPMI 1640 | GIBCO | 11875-093 | ||
| Syringe | B-D | 309602 | ||
| Vybrant CFSE Kit | Invitrogen (Molecular Probes) | V12883 |
References
- Blattman, J. N., Wherry, E. J., Ha, S. J., van der Most, R. G., Ahmed, R. Impact of epitope escape on PD-1 expression and CD8 T-cell exhaustion during chronic infection. J Virol. 83 (9), 4386-4394 (2009).
- Jenkins, M. R., Tsun, A., Stinchcombe, J. C., Griffiths, G. M. The strength of T cell receptor signal controls the polarization of cytotoxic machinery to the immunological synapse. Immunity. 31 (4), 621-631 (2009).
- Ingulli, E. Tracing tolerance and immunity in vivo by CFSE-labeling of administered cells. Methods Mol Biol. 380, 365-376 (2007).
- Durward, M. A., Harms, J., Magnani, D. M., Eskra, L., Splitter, G. A. Discordant Brucella melitensis antigens yield cognate CD8+ T cells in vivo. Infect Immun. 78 (1), 168-176 (2010).
- Lyons, A. B., Parish, C. R. Determination of lymphocyte division by flow cytometry. J Immunol Methods. 171 (1), 131-137 (1994).
- Weston, S. A., Parish, C. R. New fluorescent dyes for lymphocyte migration studies. Analysis by flow cytometry and fluorescence microscopy. J Immunol Methods. 133 (1), 87-97 (1990).
- Akondy, R. S. The yellow fever virus vaccine induces a broad and polyfunctional human memory CD8+ T cell response. J Immunol. 183 (12), 7919-7930 (2009).
- Wallace, P. K. Tracking antigen-driven responses by flow cytometry: monitoring proliferation by dye dilution. Cytometry A. 73 (11), 1019-1034 (2008).
- Labadi, A., Balogh, P. Differential preferences in serosal homing and distribution of peritoneal B-cell subsets revealed by in situ CFSE labeling. Int Immunol. 21 (9), 1047-1056 (2009).
- Suffner, J. Dendritic cells support homeostatic expansion of Foxp3+ regulatory T cells in Foxp3.LuciDTR mice. J Immunol. 184 (4), 1810-1820 .
