显微切割的黑寡妇蜘蛛丝绸生产腺体
Summary
在这里，我们描述了一个有效的策略，以消除雌性黑寡妇蜘蛛腹部的丝生产腺体。此过程允许的七个不同的丝绸生产腺体高度纯化的时尚，一个调查研究蜘蛛丝的生产和纤维大会的重要的过程中迅速隔离。
Abstract
现代蜘蛛自旋高性能纤维丝，具有广泛的生物学功能，包括运动，捕获猎物和保护发展的后代 1,2 。蜘蛛来完成这些任务的纺纱几个不同的光纤类型有不同的力学性能。这种专业化的光纤类型有发生，通过不同的丝腺，小biofactories功能的演变。这些biofactories制造和储存大量的丝蛋白纤维生产。通过一系列复杂的生化事件，这些丝蛋白是从液态转换成固体物质一经挤出。
机械的研究表明，蜘蛛丝都强于高强度钢3。了解蜘蛛丝线的结构和功能之间的关系的分析发现，蜘蛛丝主要包括蛋白质，或fibroins，在其蛋白质序列4块重复。通过翻译的丝绸的cDNA分析，作出贡献，以令人难以置信的蜘蛛丝的拉伸强度和可扩展性的分子共同签名正在揭开。由于蜘蛛丝的非凡的材料特性，世界各地的研究实验室都在竞相理解和模仿的纺纱工艺，生产人造丝纤维，商业，军事和工业应用。纺纱的研究实验室中的人造蜘蛛丝的主要挑战之一，涉及了从丝绸生产腺体的纤维的挤压过程中发生的生化过程的完整的理解。
在这里，我们提出了七个不同的丝绸生产cobweaving黑寡妇蜘蛛，其中包括主要和次要的ampullate腺体腺体[生产吊斗铲和脚手架丝绸] 5,6，tubuliform [综合蛋的情况下丝] 7隔离的方法，8，flagelliform [COB -织布未知功能]，总[胶丝，aciniform [综合猎物包装和蛋的情况下线程] 9号和梨状[生产附件光盘丝绸] 10。这种方法是根据麻醉蜘蛛与二氧化碳气体，随后的分离从腹部的头胸部和腹部的显微切割获得的丝绸生产的腺体。随着丝绸生产的不同腺体分离，这些组织可用于检索不同的大分子，包括实时定量PCR，北部，免疫印迹，质谱（MS或MS / MS）分析，确定不同的生化分析新的蚕丝蛋白序列，蛋白质参与丝绸大会通路，或使用完整的组织细胞培养或组织学实验搜索。
Protocol
Discussion
我们从黑寡妇蜘蛛丝生产腺体的显微解剖的方法提供了一种有效的手段，获得高度纯化的的丝绸生产的腺体。解剖在1.5至3小时就可以完成，产生了七个不同的一套完整的丝绸生产从cobweavers腺体。获得高度纯化的样品丝腺，让调查人员能够执行广泛的生化研究，包括确定新的丝绸或使用质谱分析mRNA水平的选择性表达的基因在不同的腺体内腺体管腔内容存储伴侣蛋白，并在体外培养特定腺体?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由一个NSF的锐格兰特MCB – 0950372题为黑寡妇蜘蛛丝的分子表征支持。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium chloride | EM Science | SX0420-1 | 0.1 M in water | |
| Diethyl pyrocarbonate | Sigma | D-5758 – 5 ml | 0.1% v/v | |
| Sodium citrate | Sigma | S1804 – 1 kg | 0.015 M in water | |
| Dissecting microscope | Leica Microsystems | Leica MZ16 | ||
| Digital microscope camera | Leica Microsystems | DFC320 | Software – Leica Application Suite v2.8.1 | |
| Vannas scissors | World Precision Instruments | 500260 | ||
| Stainless steel forceps | World Precision Instruments | 501764 | Mini Dumont #M5S | |
| Insect pins | Indigo Instruments | 33414-2 | Insect pins #2 | |
| Small or large dissection dishes | Living Systems Instrumentation | DD-50-S or DD-90-S | 52 mm diameter x 18 mm H (Sylgard Depth ~6mm) or 93 mm x 22 mm | |
| Drosophila culture vials | Carolina Biological Supply Company | FR-17-3076 | Size is 31.75 mm diameter x 101.6 mm |
References
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