Terminaux de chargement nerveuse chez la drosophile avec des indicateurs de calcium
Summary
Le calcium est un messager omniprésent dans le système nerveux, indispensable pour déclencher la libération des neurotransmetteurs et des changements dans la force synaptique. Ici nous démontrons une technique pour le chargement de Ca 2 +-indicateurs dans les terminaisons nerveuses chez la drosophile. Nous démontrons également la fabrication de l'appareillage nécessaire et de souligner les points critiques pour le succès de la technique.
Abstract
Le calcium joue de nombreux rôles dans le système nerveux, mais aucune n'est plus impressionnant que tant que le déclencheur de la libération de neurotransmetteurs, et aucun n'est plus profond que comme le messager essentiel pour la plasticité synaptique qui soutient l'apprentissage et la mémoire. Pour élucider les mécanismes moléculaires de Ca 2 +-dépendante des mécanismes synaptiques, un système modèle est nécessaire à la fois malléable et physiologiquement génétiquement accessibles. Drosophila melanogaster fournit un tel modèle. Dans ce système, génétiquement codés indicateurs fluorescents sont disponibles pour détecter les changements de Ca 2 + dans les terminaisons nerveuses. Cependant, ces indicateurs ont une sensibilité limitée à Ca 2 + et montrent souvent une réponse non-linéaire. Synthétique des indicateurs fluorescents sont mieux adaptés pour mesurer la rapidité de Ca 2 + changements liés à l'activité nerveuse. Ici nous démontrons une technique pour le chargement de dextran conjugué synthétiques Ca 2 + dans les terminaisons nerveuses des indicateurs vivent dans les larves de drosophile. Un accent particulier est mis sur les aspects des protocoles les plus essentiels à la réussite de la technique, telles que la façon d'éviter des décharges d'électricité statique le long des nerfs isolés, le maintien de la santé de la préparation pendant les périodes de chargement prolongées, et assurer la survie des axones en fournissant Ca 2 + de promouvoir des terminaisons axonales étanchéité rompu. Faible affinité dextran conjugué Ca 2 +-indicateurs, tels que fluo-4 et Rhod, sont disponibles, qui montrent un haut rapport signal sur bruit tout en perturbant minimalement présynaptique Ca 2 + dynamique. Dextran-conjugaison permet d'éviter de Ca 2 + indicateurs étant séquestrées dans des organites comme les mitochondries. La technique de chargement peut être appliquée également aux larves, les embryons et les adultes.
Protocol
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Schneider’s Insect Medium | Reagent | Sigma | S0146 | must contain L-glutamine and calcium |
| L-glutamic acid monosodium salt hydrate | Reagent | Sigma | G1626 |
References
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