Ponta de dedo Metodologia de amostragem de sangue para a determinação da apoptose induzida pelo exercício de Linfócitos
Summary
O exercício é capaz de induzir a apoptose em células do sistema imunológico. Existem limitações de medição diversos, particularmente relacionadas com a quantidade de tempo necessário para isolar e tratar uma amostra de sangue antes da avaliação. Demonstrado é um procedimento rápido e minimamente invasivo para a análise do exercício apoptose induzida por linfócitos.
Abstract
Exercício é um estímulo fisiológico capaz de induzir a apoptose em células do sistema imunológico. Até à data, várias limitações foram identificadas com a medição deste fenômeno, particularmente em relação à quantidade de tempo necessário para isolar e tratar uma amostra de sangue antes da avaliação da morte celular. Devido a isso, é difícil determinar se os aumentos relatados em apoptose de células imunes podem ser contribuíram para o efeito real do exercício sobre o sistema, ou são um reflexo do tempo e de processamento necessário para, eventualmente, obter esta medida. Neste artigo vamos demonstrar um procedimento rápido e minimamente invasivo para a análise da apoptose induzida pelo exercício de linfócitos. Ao contrário de outras técnicas, o sangue total é adicionado a um painel de anticorpos imediatamente após a obtenção de uma amostra. Após o período de incubação, as hemácias são lisadas e as amostras estão prontas para serem analisados. O uso de um procedimento de amostragem ponta de dedo reduz o volume de sangue necessário, e minimiza o desconforto para o indivíduo.
Protocol
Discussion
Um procedimento de coleta de amostra e minimamente invasiva posterior análise é demonstrado para a análise das fases precoce e tardia da apoptose induzida pelo exercício de linfócitos. Também é possível excluir aqueles claramente células, que são necróticas, e não apoptóticas. Este procedimento supera os inconvenientes e desconforto associado a punção venosa invasoras da região antecubital em momentos múltiplos antes, durante e imediatamente após o exercício, ou conseguir um cateter para a duração d…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Esta pesquisa foi suportada por um Grant Faculdade Nova do Conselho de Bolsas da Faculdade de Western Kentucky University.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Flow Cytometry Binding Buffer | eBioscience | 00-4222-26 | ||
| RBC Lysis Buffer | eBioscience | 00-4333-57 | ||
| Lancet Device | Accu Check Soft Touch | Roche Diagnostics Corp. | ||
| Capillary tubes | Heparinized Capillary Tubes | Chase Scientific Glass, Inc. | 501 | |
| Centrifuge | GmC Lab | Gilson | PMS-880 | |
| Annexin V-FITC Conjugated | Biovision Inc. | K201-400-1 | ||
| CD4-PE Conjugated | Anti-human, clone RPA-T4 | eBioscience | 12-0049-42 | |
| CD8-PE Conjugated | Anti-human, clone OKT8 | eBioscience | 12-0086-73 | |
| CD19-PE Conjugated | Anti-human, clone HIB19 | eBioscience | 12-0199-42 | |
| 7-AAD Viability Staining Solution | eBioscience | 00-6993-50 | ||
| CD45RA-APC Conjugated | Anti-human, clone HI100 | eBioscience | 17-0458-42 | |
| Flow cytometer | C6 | Accuri |
References
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