İnsan Nöral Kök Hücreler Sayma
Summary
Canlı hücreler tam sayısının Bilgi, birçok doku kültürü manipülasyonlar için gereklidir. Bu protokol, canlı ve ölü hücreleri arasındaki ayrım ve hemasitometre kullanarak hücrelerin miktarını nasıl açıklamaktadır. Insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) sayma açıklar olsa da, diğer hücre türleri için kullanılabilir.
Abstract
Immünsitokimya veya hücre transfections için kaplama hücreleri gibi birçok rutin doku kültürü manipülasyonlar, bir hücre süspansiyonu belirli bir hacmi canlı hücreler tam sayısının Bilgi için gereklidir. Bu protokol, canlı ve ölü hücreleri arasındaki farklılıklarda ve hücre konsantrasyonu ve toplam hücre sayısı hemasitometre kullanarak miktarının belirlenmesi için basit ve hızlı bir yöntem açıklanır. Bu prosedür, öncelikle bir büyüme yüzey hücreleri ayırma ve medya onları resuspending gerektirir. Sonra, hücrelerin Tripan mavi (ideal kadran başına 20-50 hücre verecek bir konsantrasyon) bir çözüm seyreltilmiş ve hemasitometre yerleştirilir. Son olarak, biri 1 mm 2 kadranda (0,1 ul) ve seyreltme faktörü ile çarpılarak hacmi ortalama bölme, rastgele seçilen birkaç kadran ortalama canlı hücrelerin sayılarını l. ortalama hücre sayısını verir Ul toplam hacmi bu hücre konsantrasyonu Çarpma toplam hücre sayısını verir. Bu protokol, insan sinir kök / prekürsör hücrelerinin (hNSPCs) sayma açıklar, aynı zamanda birçok diğer hücre türleri için kullanılabilir.
Protocol
Discussion
Bu protokol, çeşitli hücreleri içeren deneyler bir hücre konsantrasyonu belirlemek için basit ve hızlı bir şekilde açıklamaktadır. 3d açıklanan kısayolu kullanarak, hızlı ve doğru bir hücre konsantrasyonu ve belirli bir hacmi toplam hücre sayısı belirleyebilirsiniz.
Acknowledgements
Yazarlar, Çocuk Hastanesi, Orange County hNSPC kültürleri Araştırma Enstitüsü Ulusal İnsan Nöral Kök Hücre Kaynak Dr. Philip H. Schwartz kabul etmek istiyorum.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Phase Contrast Hemacytometer | Tool | Hausser | 02-671-54 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Trypan Blue Stain 0.4% | Reagent | Gibco | 15250-061 | Distributed by Invitrogen under the indicated catalog # |
References
- Marchenko, S., Flanagan, L. A. Passaging Human Neural Stem Cells. Journal of Visualized Experiments. 7, (2007).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Using a Hemacytometer. BioEd Online. , (2008).
- Caprette, D. a. v. i. d. R. Counting Chamber (Hemacytometer). BioEd Online. , (2008).
