मानव तंत्रिका स्टेम कोशिकाओं passaging
Summary
इन विट्रो में मानव तंत्रिका स्टेम / अग्रदूत साबित कोशिकाओं (hNSPCs) में हेरफेर करने की क्षमता के लिए उपचारात्मक उद्देश्यों के लिए सेल प्रत्यारोपण के रूप में उनकी उपयोगिता की जांच करने के लिए और मानव तंत्रिका विकास का पता लगाने के लिए अनुमति देता है. इस प्रोटोकॉल मानव स्टेम सेल अनुसंधान की बढ़ती reproducibility की उम्मीद में संवर्धन और passaging hNSPCs की एक विधि प्रस्तुत करता है.
Abstract
इन विट्रो में मानव तंत्रिका स्टेम / अग्रदूत साबित कोशिकाओं (hNSPCs) में हेरफेर करने की क्षमता उपचारात्मक उद्देश्यों के लिए सेल प्रत्यारोपण के रूप में उनकी उपयोगिता की जांच के रूप में अच्छी तरह के रूप में मानव तंत्रिका विकास और विकृति के कई मौलिक प्रक्रियाओं का पता लगाने का मतलब है प्रदान करता है. इस प्रोटोकॉल इस तकनीक के मानकीकरण और मानव स्टेम सेल अनुसंधान के reproducibility बढ़ाने की उम्मीद में संवर्धन और passaging hNSPCs की एक सरल विधि प्रस्तुत करता है. hNSPCs का उपयोग हम शव का प्रसव के बाद मस्तिष्क cortices से राष्ट्रीय मानव तंत्रिका स्टेम सेल संसाधन द्वारा अलग थे और बड़े के रूप में बोतल पर पक्षपाती संस्कृतियों fibronectin (Palmer एट अल, 2001.; Schwartz एट अल, 2003) के साथ लेपित. हम संस्कृति एक DMEM में हमारे hNSPCs: F12 सीरम मुक्त मीडिया EGF, FGF, और PDGF के साथ पूरक है और उन्हें बीतने 01:02 हर लगभग सात दिन. इन शर्तों का प्रयोग, संस्कृति में कोशिकाओं के बहुमत एक द्विध्रुवी आकारिकी बनाए रखने और undifferentiated तंत्रिका स्टेम सेल (जैसे nestin और Sox2 के रूप में) के मार्करों व्यक्त.
Protocol
Discussion
हमने पाया है कि इस प्रोटोकॉल hNSPCs के विश्वसनीय संस्कृतियों प्रदान करता है. हमारी कोशिकाओं के लिए एक महत्वपूर्ण कारक है कि वे काफी घने संस्कृतियों के रूप में रखा जाना और passaged कहना है कि कोशिकाओं को विरल हैं नहीं कर …
Acknowledgements
लेखकों आभार डॉ. फिलिप एच. Schwartz बच्चों के अस्पताल, उनके संवर्धन में hNSPCs और प्रारंभिक अनुदेश प्रदान करने के लिए ऑरेंज काउंटी अनुसंधान संस्थान में राष्ट्रीय मानव तंत्रिका स्टेम सेल संसाधन को स्वीकार करते हैं.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| BIT-9500 (BSA, Insulin, Transferrin) | Reagent | Stem Cell Technologies | 09500 | |
| Antibiotic-Antimycotic | Reagent | Invitrogen | 15240-062 | |
| DMEM:F12 (1X) | Reagent | Invitrogen | 11330-032 | |
| EMEM (1X) | Reagent | Mediatech | MT-10-010-CV | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fetal Bovine Serum | Reagent | Invitrogen | 10437-028 | |
| FGF, human basic recombinant | Reagent | Peprotech | 100-18B | |
| PDGF-AB | Reagent | Peprotech | 100-00AB | |
| EGF, human recombinant | Reagent | BD Biosciences | CB40052 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Cell Culture Flask, 25 cm2 | Tool | Corning | 10-126-28 | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Fibronectin, human, natural | Reagent | BD Biosciences | CB40008A | Distributed by Fisher under the indicated catalog # |
| Human Neural Stem/Precursor Cells | Cells | National Human Neural Stem Cell Resource http://www.nhnscr.org/default.htm | ||
| Cell Dissociation Buffer | Reagent | Invitrogen | 13150-016 |
References
- Flanagan, L. A., Rebaza, L. M., Derzic, S., Schwartz, P. H., Monuki, E. S. Regulation of human neural precursor cells by laminin and integrins. J. Neurosci. Res. 83, 845-856 (2006).
- Nethercott, H. N., Maxwell, H., Schwartz, P. H., Loring, J. F., Wesselschmidt, R. W., Schwartz, P. H. Neural stem cell culture. Human Stem Cell Manual: A Laboratory Guide. , (2007).
- Palmer, T. D., Schwartz, P. H., Taupin, P., Kaspar, B., Stein, S. A., Gage, F. H. Cell culture. Progenitor cells from human brain after death. Nature. 411, 42-43 (2001).
- Schwartz, P. H., Bryant, P. J., Fuja, T. J., Su, H., O’Dowd, D. K., Klassen, H. Isolation and characterization of neural progenitor cells from post-mortem human cortex. J Neurosci Res. 74, 838-851 (2003).
