非対称受容体のパターンでセルローリング軌道を勉強
Summary
我々は、非対称受容体柄の基板上にセルローリング軌跡を観察し、分析するためのプロトコルについて説明します。結果のデータは、ラベルフリー細胞分離と解析のための受容体柄の基板のエンジニアリングするのに便利です。
Abstract
非対称受容体パターン上を転動することによりフロー流に直交するセルの横方向変位は、セル1のラベルフリーの分離および分析用の新しいデバイスの開発のための機会を提供します。このようなデバイスは、連続フロー分離、または異なる細胞表現型または受容体の発現のレベルを区別するために接着を調節する受容体のパターンの横変位を使用することができます。受容体-パターニング基板上に軌跡を圧延細胞の性質を理解することは、基板とそのようなデバイスの設計のエンジニアリングが必要である。
ここでは、セルローリング接着2をサポートしている非対称の受容体のパターンでセルローリング軌道を研究するためのプロトコルを示す。 P -セレクチン受容体の明確に定義された、ミクロンスケールのパターンは、フローチャンバー内に組み込まれた金被覆スライド上にマイクロコンタクトプリントを作製した。 PSGL – 1リガンド3を発現HL60細胞がパターン化された行のフィールドを越え流れと逆の明視野顕微鏡で視覚化した。細胞は横方向のたわみ1で、その結果、パターンの傾斜縁部に沿ってロールバックして追跡。各セルは、一般的に、パターンのエッジに沿って一定の距離（エッジ追跡の長さとして定義される）のためにロール端から剥離し、下流のパターンに再接続。この剥離が困難フローチャンバーに終了するには、入り口から細胞の全体の軌跡を追跡することになりますが、粒子追跡のソフトウェアは、それらが単一の受容体に移動された時に細胞のローリング軌跡を分析し、生成するために使用されていました柄のライン。軌道は、セルの圧延速度と異なるパターンの各セルのエッジ追跡の長さの分布を得るために検討した。
このプロトコルは、受容体のパターンでセルローリング軌跡を定量化し、パターンの角とせん断応力などのこれらの工学的パラメータを関連づけるのに便利です。そのようなデータは、ラベルフリー細胞の分離および分析用マイクロ流体デバイスの設計に有効になります。
Protocol
Discussion
我々は、マイクロコンタクトプリンティング2を用いて作製した非対称受容体柄の表面にセルローリング軌跡を調べるために、プロトコルを記述している。 PEGとP -セレクチンの領域の間に明確なコントラストを示すパターン化表面の光学顕微鏡像は、スタンピングが成功したかどうかを確認するために使用することができます。シャープ、ストレートエッジは刻印がよく実行されると…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
このプロジェクトは、MITの技術革新のためのデシュパンデセンター（RKとJMK）と化学と生物学的分離プログラムを通じてRKにNSFのキャリア賞0952493によってサポートされていました。我々は兵士のナノテクノロジー（ISN）とその施設の使用のためのMITのマイクロ技術研究所（MTL）のための研究所に感謝する。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Human promyelocytic leukemia cells | ATCC | CCL-240 | HL60 cells | |
| Gold-coated glass slides | EMF | TA134 | Gold slides | |
| (1-Mercaptoundec-11-yl)tetra(ethylene glycol) | Sigma-Aldrich | 674508 | PEG | |
| Recombinant human P-selectin | R&D Systems Inc. | ADP3-050 | P-selectin | |
| Bovine serum albumin | Rockland Immunochemicals, Inc. | BSA-50 | BSA | |
| Dulbecco’s phosphate buffered saline | Mediatech Inc. | 21-030 | DPBS | |
| Sulfuric acid | Sigma-Aldrich | 339741 | ||
| Hydrogen peroxide | Sigma-Aldrich | 316989 |
References
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