Un dispositivo de microfluidos con los patrones de Surco para el estudio del comportamiento celular
Summary
Se describe un protocolo para la fabricación de dispositivos de microfluidos que puede permitir la captura de células y la cultura. En este enfoque micro modelado como ranuras dentro de los canales de microfluidos se utilizan para crear las regiones de baja tensión de corte dentro de la celda que se puede acoplar.
Abstract
Se describe un dispositivo de microfluidos con los patrones microgrooved para estudiar el comportamiento celular. Esta plataforma de microfluidos consiste en un canal superior de fluidos y un sustrato microgrooved fondo. Para la fabricación de los canales microgrooved, un alto poli (dimetilsiloxano) (PDMS) molde que contiene la impresión de los canales de microfluidos estaba alineado y unido a un sustrato microgrooved. El uso de este dispositivo, las células de fibroblastos de ratón fueron inmovilizados y modelado en sustratos microgrooved (25, 50, 75 y 100 de ancho micras). Para estudiar la apoptosis en un dispositivo de microfluidos, los medios de comunicación que contiene peróxido de hidrógeno, Annexin V y yoduro de propidio se perfundió en el canal de fluido durante 2 horas. Hemos encontrado que las células expuestas al estrés oxidativo se convirtió en la apoptosis. Estas células apoptóticas fueron confirmados por la anexina V, que unido a la fosfatidilserina en la hoja exterior de la membrana plasmática durante el proceso de apoptosis. El uso de este dispositivo de microfluidos con los patrones microgrooved, el proceso de apoptosis se observó en tiempo real y se analizaron mediante el uso de un microscopio invertido que contiene una cámara de incubación (37 ° C, 5% de CO 2). Por lo tanto, este dispositivo de microfluidos con sustratos incorporados microgrooved podría ser útil para el estudio del comportamiento celular y la realización de alto rendimiento de detección de drogas.
Protocol
Discussion
Las células fueron inmovilizados y modelado en sustratos microgrooved en un dispositivo de microfluidos. El proceso de la apoptosis de las células expuestas al peróxido de hidrógeno se observó en tiempo real y se analizaron mediante el uso de anexina V y yoduro de propidio. Así, este dispositivo de microfluidos que contienen canales de microsurco podría ser útil para la detección de drogas de alto rendimiento.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PDMS | Reagent | K.R. Anderson Co. Inc. | 2065622 | Poly(dimethylsiloxane), Dow Corning Sylgard 184 (8.6 lb) |
| DMEM | medium | Invitrogen | 11965 | Dulbecco’s Modified Eagle’s Media |
| FBS | serum | Invitrogen | 10082-147 | Fetal Bovine Serum |
| Hydrogen peroxide | Reagent | Sigma Aldrich | H1009 | |
| Apoptosis assay | Invitrogen | V13242 | Annexin A, propidium iodide | |
| Negative photoresist | Microchem | SU-8 2015 | ||
| Si wafer | Tool | 4 inch silicone wafer | ||
| Reactive oxygen plasma | Reagent | Harrick Scientific | treat wafer 5 min at 30W | |
| inverted microscope | Tool | Nikon | TE 2000 |
References
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