イモリでは、レンズの絞り色素上皮細胞(IPEs)の分化転換によって背側の虹彩から常に再生成されます。ここでは、イモリの眼への文化背側と腹イモリIPE細胞とその移植する手順を説明します。移植細胞は、組織切片と免疫組織化学によって研究されています。
イモリやアホロートルのようなサンショウウオは、四肢、脊髄、眼、脳、心臓、顎1と尾など、その失われた身体の部分の多くを再生成する能力を有する。具体的には、イモリは、そのレンズの再生能力のための固有のものです。レンズの取り外し時には、背側の虹彩のIPE細胞は水晶体細胞への分化形質転換すると最終的に約月に2,3の新しいレンズを形成する。再生のこのプロパティは、腹側の虹彩細胞で展示されることはありません。虹彩の細胞の再生の可能性は 、in vitro培養IPE細胞での移植を行うことによって調べることができます。培養には、背側と腹側の虹彩細胞が最初に目から絶縁されており、2週間の期間( 図1)に別々に培養した。これらの培養細胞はreaggregatedとイモリの目に戻って注入される。過去の研究では、腹骨材は4,5( 図2)このように生体内でのプロセスにおいて 、recapitulating、レンズを形成しないのに対し、背側再集合させるが、そのレンズ形成能力を維持することが示されている。背側と腹側の虹彩細胞の再生の可能性を決定するこのシステムは、レンズの再生に関与する遺伝子やタンパク質の役割を研究するに非常に便利です。
このプロトコルは、イモリのレンズ再生のメカニズムを研究するためのin vitroの系を確立しています。凝集するので(どちらか背側または腹側は誠実には再生、この手法の間に生体内での行動でイモリの遺伝子導入に必要と関数のゲインだけでなく、機能の実験7,8,9の損失のために使用することができる途方もない労力を軽減することができる従ってください。また、 、全体としての集合体または虹彩は容易に増殖因子で処理し、このプロトコルで説明されているようにその効果を調べることができます。例えば、BMP経路の役割はこのテクニック6を使用して検討されている。
The authors have nothing to disclose.
この作品は、PATにNIHの助成金Ey10540によって賄われていた。
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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Lugol’s solution | Sigma | L-6146 | ||
HEPES | Sigma | H-4034 | ||
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonic acid | Sigma | E-10521 | ||
Dispase | Gibco | 17105-041 | ||
Trypsin 1:250 | Gibco | 27250018 | ||
L-15 ( Leibovitz) | Sigma | L-4386 | ||
DNase 1 | Sigma | D5025-150KU | ||
Kanamycin Sulfate | Gibco | 100x, 15160 | ||
FBS | Sigma | F4135 | ||
Fungizone (amphotericin B solution) | Sigma | A2942 | ||
24 well collagen coated plate | BD biosciences | 354408 |