剥离技术说明玻璃体,视网膜,并从小鼠眼晶状体,通过离心分离,并与蛋白质分析表征剜。
虽然作为一个重要的遗传性视网膜疾病的遗传模型小鼠视网膜出现,鼠标玻璃体仍然有待探索。玻璃体是一个高水覆人工以及眼蛋白质在疾病过程中积累的视网膜细胞外基质 。1-3异常玻璃体和视网膜之间的相互作用的几种疾病,如视网膜脱离,增殖性糖尿病视网膜病变,葡萄膜炎,和增生性玻璃体视网膜病变的基础。 4相对鼠标玻璃体体积明显比人类的玻璃体(图1),是因为鼠标镜头中占有近75%的眼睛。5这使得鼠标玻璃体生化研究具有挑战性。在这个视频文章中,我们目前的技术来剖析和隔离鼠标玻璃体视网膜,这将允许使用转基因小鼠模型,以更清楚地界定这种细胞外基质的作用,在玻璃体视网膜疾病的发展。
然而,转基因小鼠视网膜和玻璃体视网膜疾病调查的重要模式。6-10鼠标玻璃体,包括比较由于在小鼠眼大镜头玻璃体人类眼睛的比例明显较小。5这使得很难分离和纯化鼠标玻璃体。了解蛋白质与疾病,如增生性糖尿病视网膜病变,年龄相关性黄斑变性,葡萄膜炎,视网膜脱离玻璃体变化会给机制的洞察力,他们的进步。这种可视化的实验协议,提供了一种手段获取和净化鼠标玻璃体,同时最大限度的酶和蛋白组学分析的蛋白质产量。
The authors have nothing to disclose.
争取视线和研究防盲提供了资金。
Name | Company | Catalog Number | Comments |
---|---|---|---|
15°, BD Beaver Microsurgical Blade | Becton-Dickinson | 374881 | |
PBS, pH 7.4 | Invitrogen | 70011-044 | |
0.22 Fine-Castroviejo Suturing Forceps | Storz Ophthalmics | E1805 | |
0.12 Colibri forceps | Storz Ophthalmics | 2/132 | |
Microcon Centrifugal Filter Ultracel YM-100 or YM-50 | Millipore | 42412, 42415 | |
SOD Activity Colorimetric Assay Kit | Abcam | Ab65354 | |
Weck-Cel surgical spears | Medtronic | 0008680 | |
Protease inhibitor cocktail | Roche | 11 836 170 001 | |
Flamingo fluorescent gel stain | Bio-Rad | 161-04910 |