ثقافة الخلايا الطبيعية في سياق ثلاثية الأبعاد من يمثل طريقة بديلة لدراسة الأحداث المبكرة اللازمة للتحول الخليوي وتكون الأورام. وتستخدم هذه الطريقة لزراعة المبيض الطبيعي والخلايا بوقي لدراسة الأحداث المبكرة في تكوين سرطان المبيض.
سرطان المبيض هو السبب الرئيسي الخامس للوفيات السرطان في النساء ويبلغ معدل الوفيات 63 ٪ في الولايات المتحدة 1. نوع خلية من خلايا المنشأ لسرطان المبيض ما زال في السؤال ، وربما تكون إما سطح المبيض الظهارة (OSE) أو ظهارة القاصية من 2،3 خمل قناة فالوب. سوف زراعة الخلايا العادية بوصفها ثقافة الأولية في المختبر تمكن العلماء من طراز تغييرات محددة قد تؤدي إلى الإصابة بسرطان المبيض في ظهارة متميزة ، وبالتالي تحديد نوع الخلية نهائيا المنشأ. هذا سيسمح تطور المؤشرات الحيوية أكثر دقة ، النماذج الحيوانية مع التغيرات النسيجية الخاصة الجينات ، واستراتيجيات وقاية أفضل المستهدفة لهذا المرض.
الحفاظ على الخلايا الطبيعية في الهلاميات المائية ألجينات يشجع على المدى القصير في الثقافة المختبر من الخلايا في سياق ثلاثي الأبعاد وعلى تراخيص إدخال الحمض النووي البلازميد ، سيرنا ، والجزيئات الصغيرة. من جانب أجهزة التثقيف في القطع التي يتم اشتقاق من التخفيضات الاستراتيجية باستخدام مشرط وثقافات عدة من جهاز واحد يمكن توليدها ، وزيادة عدد من التجارب من حيوان واحد. هذه التخفيضات الجوانب نموذج التبويض مما يؤدي إلى انتشار بيئة نظام التشغيل ، وهو أمر يرتبط مع تشكيل سرطان المبيض. يمكن تربيتها أنواع الخلايا مثل بيئة نظام التشغيل التي لا تنمو جيدا على السطوح البلاستيكية باستخدام هذا الأسلوب ، وتسهيل التحقيق في العمليات الخلوية العادية أو أقرب الأحداث في تشكيل السرطان 4.
ويمكن استخدام الجينات الهلاميات المائية لدعم نمو العديد من أنواع الأنسجة 5. الجينات هي السكاريد خطية مؤلفة من تكرار وحدات من حامض – D – β وmannuronic α – L – حمض guluronic التي يمكن crosslinked مع أيونات الكالسيوم ، مما أدى إلى إجراء التبلور لطيف لا ضرر 6،7 الأنسجة. مثل غيرها من ثلاثية الابعاد المصفوفات ثقافة الخلية مثل Matrigel ، ألجينات يوفر الدعم الميكانيكية للأنسجة ، إلا أن البروتينات لا يتم التفاعل مع مصفوفة الجينات ، وبالتالي وظائف الجينات والمصفوفة خارج الخلية الاصطناعية التي لا تبدأ الخلية إشارة 5. وهيدروجيل ألجينات يعوم في مستوى الخلية مستنبت ويدعم بنية نمو الأنسجة في المختبر.
ويقدم طريقة لإعداد ، والانفصال ، وتضمينها في المبيض وقطع الجهاز بوقي الهلاميات المائية في الجينات ، التي يمكن في ظلها في الثقافة لمدة تصل الى أسبوعين. يوصف ايضا باطلاق سراح الأنزيمية من الخلايا لتحليل عينات من البروتينات والحمض النووي الريبي من ثقافة الجهاز. أخيرا ، ونمو أنواع الخلايا الأولية غير ممكن من دون تخليد الجينية من الفئران ويسمح للمحققين لاستخدام الفئران المعدلة وراثيا وخروج المغلوب.
تطوير نظام الجهاز ثقافة ثلاثي الأبعاد باستخدام الجينات الهلاميات المائية يمثل تنوعا طريقة لتحليل العديد من أنواع الأنسجة المختلفة من طائفة واسعة من الكائنات الحية. ويمكن تمديد استخدام الثقافات 3D لمجالات هندسة الأنسجة والطب التجديدي ، حيث انها توفر منصة الاعدام عل?…
The authors have nothing to disclose.
وأيد هذا العمل من قبل صندوق أبحاث السرطان المبيض [منح LT/UIC/01.2011] ، ومركز اتحاد المحاكم الإسلامية للعلوم الطبية وبالحركة ، ومركز السرطان UIC ، والمعاهد الوطنية للصحة منح C06RR15482.
وقد أجريت تجارب على الحيوانات وفقا للمبادئ التوجيهية واللوائح التي وضعتها AAALAC تحت رعاية الحيوانات البروتوكولات المعتمدة من قبل لجنة رعاية الحيوان ، واستخدم في المحاكم الاسلامية. إيواء الحيوانات لهذا المشروع في غرف الحاجز في مختبر الموارد البيولوجية (BRL) في جامعة إلينوي في شيكاغو. ويبلغ عدد موظفي BRL البيطرية تماما أن تراقب الحيوانات على الأقل مرتين يوميا ، ويقدم المشورة بشأن رعاية الحيوان.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
Leibovitz L-15 medium | Gibco | 11415 | |
αMEM medium | Gibco | 12000-022 | |
Sodium alginate | Novamatrix | ||
Sodium cacodylate | Sigma Aldrich | C0250 | |
Polypropylene mesh fiber | McMaster Carr | 45″ wide roll; 0.0041″ opening | |
Lipofectamine 2000 | Invitrogen | 11668 | |
Penicillin/streptomycin | Gibco | 15070-063 | |
Alginate lyase | Sigma Aldrich | A1603 | |
A1603 | Sigma Aldrich | C9697 | From Clostridium histolyticum |
Bovine serum albumin | MP Biomedicals | 103700 | |
Fetal bovine serum | Gibco | Gibco | |
ITS solution | Roche | 11074547001 | Insulin/transferrin/sodium selenite |
Cytokeratin 8 antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | TROMA-1 | Use at 1:200 |
DAPI | Vector Labs | H1200 | |
Bromodeoxyuridine | Sigma | B50002-1G | Final concentration 10 μM |