प्रेरण और चूहों में दत्तक विलंबित प्रकार hypersensitivity की निगरानी
Summary
विलंबित प्रकार hypersensitivity (डीटीएच) एक सूजन प्रतिक्रिया CCR7 effector स्मृति टी lymphocytes (मंदिर) द्वारा मध्यस्थता है. यहाँ हम का प्रदर्शन कैसे विशिष्ट प्रतिजन मंदिर कोशिकाओं को सक्रिय करने के लिए, लुईस चूहों में दत्तक डीटीएच प्रेरित और भड़काऊ प्रतिक्रिया की निगरानी.
Abstract
विलंबित प्रकार hypersensitivity (डीटीएच) एक सूजन प्रतिक्रिया CCR7 effector स्मृति टी lymphocytes कि एक प्रतिजन के खिलाफ जो प्रतिरक्षा प्रणाली primed किया गया है इंजेक्शन के साइट घुसपैठ द्वारा मध्यस्थता है. भड़काऊ प्रतिक्रिया और प्रतिजनी चुनौती के साइट की लालिमा और सूजन की विशेषता है. यह एक सुविधाजनक मॉडल immunosuppressants के vivo प्रभावकारिता में निर्धारित है. प्रतिजन विशेष टी lymphocytes के दत्तक हस्तांतरण या एक प्रतिजन, और दिया त्वचा के क्षेत्र में भड़काऊ प्रतिक्रिया को प्रेरित करने के लिए प्रतिजन के साथ बाद intradermal चुनौती के साथ सक्रिय प्रतिरक्षण द्वारा Cutaneous डीटीएच भी प्रेरित कर सकते हैं. डीटीएच प्रतिक्रियाओं विभिन्न प्रतिजनों के लिए प्रेरित किया जा सकता है उदाहरण के ovalbumin, ट्यूबरकुलीन, टिटनेस toxoid, या ताली लगाने का छेद लंगड़ाहट hemocyanin के लिए. Autoantigen के खिलाफ इस तरह की प्रतिक्रियाओं भी प्रेरित किया जा सकता है, उदाहरण के लिए प्रयोगात्मक MBP, एकाधिक काठिन्य (1) के लिए एक पशु मॉडल के साथ autoimmune Encephalomyelitis प्रेरित के साथ चूहों में बुनियादी प्रोटीन (MBP) myelin. यहाँ हम प्रदर्शन कैसे लुईस चूहों में एक दत्तक डीटीएच प्रतिक्रिया उत्पन्न करने के लिए. हम पहले इन विट्रो में ovalbumin विशेष टी कोशिकाओं को प्रोत्साहित करेंगे और अनुभवहीन चूहों को इन सक्रिय कोशिकाओं intraperitoneally इंजेक्षन. कोशिकाओं 2 दिनों के लिए vivo में संतुलित करने की अनुमति के बाद, हम एक कान के पंख में ovalbumin के साथ चूहों को चुनौती, जबकि दूसरे कान wil खारा प्राप्त होगा. भड़काऊ प्रतिक्रिया दिखाई 3-72 घंटे बाद हो जाएगा और कान मोटाई डीटीएच गंभीरता का एक संकेत के रूप में मापा जाएगा.
Protocol
Discussion
प्रतिजनी चुनौती अन्य साइटों पर भी प्रदर्शन कर सकते हैं उदाहरण के लिए वापस (2) त्वचा में हो. लेकिन हम है कि चुनौतीपूर्ण लगता है. कान के पंख, जैसा कि इस वीडियो में दिखाया गया है, का उपयोग डीटीएच प्रतिक्रिया का सबसे स?…
Acknowledgements
हम GFP लेबल, ovalbumin विशेष टी सेल लाइन इस प्रोटोकॉल में प्रयोग किया जाता के साथ हमें प्रदान करने के लिए धन्यवाद डा. सिकंदर Flugel (Martinsried, जर्मनी).
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco/Invitrogen | 12430-062 | 500ml | |
| Sodium pyruvate | Sigma | S8636 | 1 mM final, in Stimulation medium | |
| Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine | Cambrex/BioWhittaker | 17-718R | 100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium | |
| Non essential amino acids | Sigma | R7131 | NEAA, 1% final, in Stimulation Medium | |
| RPMI vitamins | Sigma | R7256 | 1% final, in Stimulation medium | |
| beta-mercaptoethanol | Sigma | M6250 | 2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium | |
| Syngeneic rat serum | 1% final. See explanation in Protocol. | |||
| Ovalbumin | Sigma | A5503 | 10 µg/ml final, in Stimulation Medium. |
References
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. , 166-936 (2001).
- Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and monitoring of active delayed type hypersensitivity (DTH)in rats. J Vis Exp. (5), (2007).
