收养大鼠迟发型超敏反应的感应和监测

Summary

迟发型超敏反应（DTH）是CCR7的效应记忆T（TEM）淋巴细胞介导的​​炎症反应。在这里，我们将演示如何激活抗原特异性的透射电镜细胞，诱导Lewis大鼠收养的DTH和监测的炎症反应。

Abstract

迟发型超敏反应（DTH）是一个CCR7的效应记忆T淋巴细胞浸润针对其免疫系统已催芽的抗原注射部位介导的炎症反应。炎症反应的特点是由抗原挑战的部位的皮肤发红和肿胀。这是一个方便的模型，以确定在体内的免疫抑制剂的疗效。可诱发皮肤直接到户，抗原特异性T淋巴细胞过继转移或与抗原的主动免疫，并随后在给定面积的皮肤，诱发炎症反应的抗原皮内挑战。 DTH反应，可诱发各种抗原，如卵清蛋白，结核菌素，破伤风类毒素，或锁孔戚血蓝蛋白。这种反应也可以对自身抗原诱导，例如，髓鞘碱性蛋白（MBP）在大鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎，多发性硬化症（1）动物模型的MBP诱导。在这里，我们将演示如何在Lewis大鼠诱发领养的DTH反应。我们将首先在体外刺激卵清蛋白特异性T细胞，注入这些天真大鼠腹腔激活细胞。允许细胞以平衡体内2天之后，我们将挑战同在一耳耳廓的卵清蛋白的老鼠，而另一只耳朵WIL收到生理盐水。炎症反应将是可见的3-72小时后，耳厚度测量的DTH严重性的迹象。

Protocol

1。卵清蛋白特异性T淋巴细胞的刺激休眠卵清蛋白特异性T细胞受到刺激照射Lewis大鼠胸腺细胞（30戈瑞）作为抗原提呈细胞（APCs）刺激中等，（准备的DMEM + PEN /链球菌/ L的过剩+ NEAA +的RPMI维生素的存在与卵清蛋白+ 2ME +大鼠血清+卵清蛋白，终浓度指出的材料清单。） 大鼠血清的制备我们从我们牺牲的大鼠胸腺捐助者的血清。 大鼠深深氟烷吸入…

Discussion

抗原的挑战，也可以在其他网站，例如背部的皮肤（2）。不过，我们发现，具有挑战性的。在此视频中显示，使用耳的耳廓，允许DTH反应的最精确的测量。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Gibco/Invitrogen	12430-062	500ml
Sodium pyruvate		Sigma	S8636	1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine		Cambrex/BioWhittaker	17-718R	100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium
Non essential amino acids		Sigma	R7131	NEAA, 1% final, in Stimulation Medium
RPMI vitamins		Sigma	R7256	1% final, in Stimulation medium
beta-mercaptoethanol		Sigma	M6250	2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium
Syngeneic rat serum				1% final. See explanation in Protocol.
Ovalbumin		Sigma	A5503	10 µg/ml final, in Stimulation Medium.