Здесь мы предлагаем простые методы, чтобы проверить и оценить наличие активных форм кислорода в клетках.
Активные формы кислорода включают число молекул, что повреждения ДНК и РНК и окисляют белки и липиды (липид перекисное). Эти реактивные молекулы содержат кислорода и включают в себя H 2 O 2 (перекиси водорода), NO (оксид азота), O 2 – (оксида анион), пероксинитрита (ONOO -), хлорноватистая кислота (HOCl) и гидроксильных радикалов (OH -) .
Окислительный видов выпускаются не только при патологических ситуациях (рак, ишемическая / реперфузии, неврологические и сердечно-сосудистой патологии, инфекционные заболевания, воспалительные заболевания 1, аутоиммунными заболеваниями 2, и т.д. …), но и при физиологическом (не патологическим) ситуациях, таких как клеточный метаболизм 3 , 4. В самом деле, АФК играют важную роль во многих клеточных путей передачи сигналов (распространение, активации клеток 5, 6, 7 и т.д. миграции.). АФК может быть вредно (тогда оно называется"Окислительного стресса и nitrosative"), когда производятся в больших количествах в внутриклеточные отсеки и клетки в целом реагируют на ROS по upregulating антиоксидантов, таких как супероксиддисмутаза (СОД) и каталазы (КАТ), глутатионпероксидазы (GPx) и глутатион (GSH), которая защищает их преобразования опасных свободных радикалов в безвредные молекулы (то есть вода). Витамины С и Е, также были описаны в качестве поглотителей ROS (антиоксиданты).
Свободные радикалы полезны в небольших количествах 3. Макрофагов и нейтрофилов-опосредованный иммунный ответ включают производство и выпуск NO, который ингибирует вирусы, болезнетворные микроорганизмы и пролиферации опухолевых 8. NO также вступает в реакцию с другими АФК и, таким образом, также играет определенную роль, как детоксикантом (АФК мусорщик). Наконец NO действует на суда для регулирования притока крови, что важно для адаптации мышц к длительной упражнение 9, 10. Ряд публикаций также продемонстрировали, что АФК участвуют в инсулине Sensitivity 11, 12.
Многочисленные методы оценки АФК имеются. В этой статье мы предлагаем несколько простых, быстрых и доступных тестов, эти анализы были подтверждены многими изданиями и обычно используются для обнаружения ROS или его эффекты в клетках млекопитающих. Хотя некоторые из этих анализов обнаружить несколько ROS, другие обнаружить только одну АФК.
Несколько патологических ситуациях, таких как воспалительные заболевания, рак, ишемии / реперфузии, а также процедур, таких, как радиация или химиотерапия (т.е. цисплатин) индуцируют АФК перепроизводства. Таким образом, обнаружения и измерения уровня РОС важна во многих основных, доклин…
The authors have nothing to disclose.
Работа выполнена при поддержке Национального института здоровья (CA142664).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
---|---|---|---|
5-(and-6)-carboxy-2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (carboxy-DCFDA) | Molecular Probes | C369 | control |
carboxy-H2DCFDA | Molecular Probes | C400 | |
Sulfanilamide | Sigma | S9251-100G | |
N-1-napthylethylenediamine dihydrochloride | Sigma | N9125-10G | |
Nitrite standard | Sigma | 237213-100G | |
GSH/GSSG-Glo Assay | Promega | V6612 | To quantify oxidized, reduced or oxidized/reduced glutathione |