Produção e Detecção de Espécies Reativas de Oxigênio (ROS) em Câncer
Summary
Aqui nós propor métodos simples para testar e avaliar a presença de espécies reativas de oxigênio nas células.
Abstract
Espécies reativas de oxigênio incluir um número de moléculas que danificam o DNA e RNA e oxidar proteínas e lipídios (peroxydation lipídica). Estas moléculas reativas de oxigênio contêm um e incluem H 2 O 2 (peróxido de hidrogênio), NO (óxido nítrico), O 2 – (ânion óxido), peroxinitrito (ONOO -), ácido hydrochlorous (HOCl) e radical hidroxila (OH -) .
Espécies oxidativas são produzidos não apenas em situações patológicas (câncer, reperfusão isquêmica /, patologias neurológicas e cardiovasculares, doenças infecciosas, doenças inflamatórias 1, doenças auto-imunes 2, etc …), mas também em situações fisiológicas (não patológicas), tais como o metabolismo celular 3 , 4. De fato, ROS desempenham um papel importante em muitas vias de sinalização celular (proliferação, ativação de células 5, 6, 7 migração etc.). ROS pode ser prejudicial (então é referido como"Stress oxidativo e nitrosativo") quando produzida em quantidades elevadas nos compartimentos intracelulares e células geralmente respondem a ROS por upregulating antioxidantes como a superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT), glutationa peroxidase (GPx) e glutationa (GSH), que protege convertendo-los perigosos radicais livres em moléculas inofensivas (água, por exemplo). Vitaminas C e E também têm sido descritos como scavengers ROS (antioxidantes).
Os radicais livres são benéficos em pequenas quantidades 3. Macrófagos e neutrófilos mediada por resposta imune envolvem a produção e liberação de NO, que inibe vírus, patógenos e da proliferação do tumor 8. NO também reage com ROS outros e, assim, também tem um papel como um desintoxicante (scavenger ROS). Finalmente NO age em navios para regular o fluxo de sangue que é importante para a adaptação do músculo ao exercício prolongado 9, 10. Várias publicações têm demonstrado também que ROS estão envolvidas na sens insulinaitivity 11, 12.
Vários métodos para avaliar a produção de ROS estão disponíveis. Neste artigo, propomos vários ensaios simples, rápido e acessível, estes ensaios têm sido validados por muitas publicações e são usados rotineiramente para detectar ROS ou dos seus efeitos em células de mamíferos. Embora alguns desses ensaios detectar múltiplas ROS, outros detectam apenas um único ROS.
Protocol
Discussion
Várias situações patológicas como doenças inflamatórias, câncer, isquemia / reperfusão, e também tratamentos como a radioterapia ou quimioterapia (cisplatina ou seja) induzem a superprodução de ROS. Assim, a detecção e medição dos níveis de ROS é importante em muitos básica, estudos pré-clínicos e clínicos. No entanto, ROS têm semi-vidas muito curtas e pode ser complicado de detectar. Aqui, propomos testes simples que são usados rotineiramente e amplamente aceites para a detecção de produ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado pelo National Institutes of Health (CA142664).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| 5-(and-6)-carboxy-2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (carboxy-DCFDA) | Molecular Probes | C369 | control |
| carboxy-H2DCFDA | Molecular Probes | C400 | |
| Sulfanilamide | Sigma | S9251-100G | |
| N-1-napthylethylenediamine dihydrochloride | Sigma | N9125-10G | |
| Nitrite standard | Sigma | 237213-100G | |
| GSH/GSSG-Glo Assay | Promega | V6612 | To quantify oxidized, reduced or oxidized/reduced glutathione |
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