Producción y la detección de especies reactivas del oxígeno (ROS) en los cánceres
Summary
Aquí proponemos métodos sencillos para probar y evaluar la presencia de especies reactivas del oxígeno en las células.
Abstract
Las especies reactivas del oxígeno incluyen una serie de moléculas que dañan el ADN y ARN, y se oxidan las proteínas y los lípidos (peroxidación lipídica). Estas moléculas reactivas contienen un átomo de oxígeno y son H 2 O 2 (peróxido de hidrógeno), NO (óxido nítrico), O 2 – (anión), peroxinitrito (ONOO -), ácido hydrochlorous (HOCl), y el radical hidroxilo (OH -) .
Especies reactivas de oxígeno se producen no sólo en situaciones patológicas (cáncer, isquemia reperfusión /, patologías neurológicas y cardiovasculares, enfermedades infecciosas, enfermedades inflamatorias 1, 2 enfermedades autoinmunes, etc …), sino también en situaciones fisiológicas (no patológicas), tales como el metabolismo celular 3 , 4. De hecho, ROS juegan un papel importante en muchas vías de señalización celular (proliferación, activación de las células 5, 6, 7 migración, etc.). ROS puede ser perjudicial (entonces se conoce como"El estrés oxidativo y nitrosativo") cuando se produce en grandes cantidades en los compartimentos intracelulares y las células responden en general a ROS por upregulating antioxidantes como la superóxido dismutasa (SOD) y catalasa (CAT), glutatión peroxidasa (GPx) y glutatión (GSH), que protege ellas mediante la conversión de los peligrosos radicales libres a las moléculas inofensivas (por ejemplo, agua). Las vitaminas C y E también se han descrito como basureros ROS (antioxidantes).
Los radicales libres son beneficiosos en pequeñas cantidades 3. Macrófagos y neutrófilos respuestas inmunes mediadas por involucrar a la producción y liberación de NO, que inhibe virus, patógenos y la proliferación del tumor 8. El NO también reacciona con otros ROS y por lo tanto, también tiene un papel como un desintoxicante (scavenger ROS). Por último, no actúa sobre los vasos para regular el flujo de sangre que es importante para la adaptación del músculo al ejercicio prolongado 9, 10. Varias publicaciones han demostrado también que las ROS participan en sens insulinapositividad 11, 12.
Numerosos métodos para evaluar la producción de ROS se encuentran disponibles. En este artículo nos proponemos varias pruebas sencillas, rápidas y asequibles, estos ensayos han sido validadas por numerosas publicaciones y se usan rutinariamente para detectar ROS o sus efectos en células de mamíferos. Aunque algunos de estos ensayos de detección de múltiples ROS, otros detectan un solo ROS.
Protocol
Discussion
Varias situaciones patológicas, como enfermedades inflamatorias, cáncer, isquemia / reperfusión, y también tratamientos como la radioterapia o la quimioterapia (cisplatino por ejemplo) induce una sobreproducción de ROS. Por lo tanto, la detección y medición de los niveles de ROS es importante en muchos estudios básicos, pre-clínicos y clínicos. Sin embargo, ROS tienen una vida media muy corta y puede ser complicado de detectar. Aquí, proponemos pruebas simples que se utilizan habitualmente y ampliamente acept…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue financiado por los Institutos Nacionales de Salud (CA142664).
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| 5-(and-6)-carboxy-2′,7′-dichlorofluorescein diacetate (carboxy-DCFDA) | Molecular Probes | C369 | control |
| carboxy-H2DCFDA | Molecular Probes | C400 | |
| Sulfanilamide | Sigma | S9251-100G | |
| N-1-napthylethylenediamine dihydrochloride | Sigma | N9125-10G | |
| Nitrite standard | Sigma | 237213-100G | |
| GSH/GSSG-Glo Assay | Promega | V6612 | To quantify oxidized, reduced or oxidized/reduced glutathione |
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