Ex vivo Mimétisme de l'hématopoïèse humaine normale et pathologique
Summary
Un système de culture en 3D pour l'hématopoïèse est décrit en utilisant du sang de cordon humain et les cellules leucémiques de moelle osseuse. Le procédé est basé sur l'utilisation d'un polyuréthane poreux synthétique revêtue d'échafaudage protéines de matrice extracellulaire. Cet échafaudage est adaptable pour accueillir une large gamme de cellules.
Abstract
Les cellules souches hématopoïétiques besoin d'un micro-environnement unique afin de soutenir la formation des cellules sanguines 1; la moelle osseuse (BM) est un complexe en trois dimensions (3D) des tissus dans lequel l'hématopoïèse est régulée par l'espace organisé microenvironnements cellulaires appelées niches 2-4. L'organisation des niches BM est critique pour la fonction ou le dysfonctionnement de la normale ou maligne BM 5. Par conséquent, une meilleure compréhension de la dans le micro vivo utilisant un mimétisme ex vivo pourrait nous aider à élucider les déterminants moléculaires, cellulaires et microenvironnement de la leucémogenèse 6.
Actuellement, les cellules hématopoïétiques sont cultivées in vitro dans deux dimensions (2D) des flacons de culture de tissus ou bien les plaques 7 nécessitant soit co-culture avec allogéniques ou xénogéniques cellules stromales ou l'ajout de cytokines exogènes 8. Ces conditions sont artificielles et diffèrent de la in vivo </em> microenvironnement en ce sens qu'ils n'ont pas les niches 3D cellulaires et d'exposer les cellules à des concentrations anormalement élevées de cytokines qui peuvent résulter de la différenciation et la perte de 9,10 pluripotence.
Ici, nous présentons un nouveau système 3D de la culture de la moelle osseuse qui simule l'environnement de vivo la croissance 3D et soutient l'hématopoïèse multilignée en l'absence de facteurs de croissance exogènes. Le très poreuse échafaudage utilisé dans ce système constitué de polyuréthane (PU), facilite la croissance cellulaire à haute densité à travers une surface spécifique supérieure à la culture monocouche classique en 2D 11. Notre travail a indiqué que ce modèle a soutenu la croissance de sang de cordon humain (CB) des cellules mononucléaires (MNC) 12 et les cellules leucémiques primaires en l'absence de cytokines exogènes. Ce mimétisme roman 3D fournit une plate-forme viable pour le développement d'un modèle expérimental pour étudier l'homme de l'hématopoïèse et d'explorer de nouveaux traitements pour la leucémie.
Protocol
Discussion
Le système de culture ex vivo 3D présenté ici nous permet d'établir un biomimétisme 3D de l'hématopoïèse qui récapitule l'architecture d'origine BM et phénotype cellulaire indépendante des cytokines exogènes. Le modèle 3D fournit la structure et le microenvironnement qui permet normales et anormales des cellules hématopoïétiques à proliférer dans des conditions similaires à celles rencontrées in vivo.
La sélection du matériau polymère …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été financé par le Fonds Thomas Richard leucémie, la dame Tata Memorial Trust, le Northwick Park Hospital Fonds leucémie Research Trust et l'Institut national de recherche en santé (INDH), au Royaume-Uni.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue No |
| Dioxan | Invitrogen | D20,186-3 |
| PBS | Gibco | 14190-094 |
| IMDM | Invitrogen | 12440-053 |
| Ficoll-Paque | GE Healthcare | 17-1440-02 |
| Penicillin/Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 |
| MTS | Promega | G3580 |
| Glutaraldehyde | Fluka Biochemika | 49624 |
| Wright-Giemsa | Sigma-Aldrich | WG32 |
| Fetal bovine serum | Gibco | 10108-165 |
| CD71 | Santa Cruz Biotechnology | sc-32272 |
| Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11001 |
| CD45-FITC | BD Pharmigen | 74895 |
| CD71-PE | BD Pharmigen | 555537 |
| CD235a-PE-Cy5 | BD Pharmigen | 555570 |
| Sodium azide | Sigma-Aldrich | S-8032 |
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