يوصف نظام ثقافة 3D لتكون الدم باستخدام دم الحبل السري البشري وابيضاض الدم خلايا نخاع العظام. وتستند هذه الطريقة على استخدام مادة البولي يوريثين سقالة الاصطناعية التي يسهل اختراقها المغلفة مع البروتينات المصفوفة خارج الخلية. هذا سقالة قابل للتكيف لاستيعاب مجموعة واسعة من الخلايا.
الخلايا الجذعية المكونة للدم تتطلب المكروية فريدة من نوعها من أجل الحفاظ على دم تشكيل خلية 1؛ نخاع العظم (BM) هي عملية معقدة ثلاثية الأبعاد (3D) تكون الدم فيها الأنسجة وينظم من قبل microenvironments الخلوية نظمت مكانيا يطلق عليه منافذ 2-4. تنظيم منافذ BM أمر بالغ الأهمية بالنسبة لوظيفة أو اختلال وظيفي من BM طبيعي أو خبيثة 5. ولذلك فإن فهم أفضل للالمكروية في الجسم الحي باستخدام محاكاة المجراة سابقا يساعدنا على توضيح المحددات الجزيئية والخلوية وmicroenvironmental من leukemogenesis 6.
حاليا، يتم استزراع الخلايا المكونة للدم في المختبر في ثنائي الأبعاد (2D) قوارير زراعة الأنسجة / 7 لوحات جيدة تتطلب إما التعاون مع ثقافة خيفي أو الخلايا اللحمية xenogenic أو إضافة السيتوكينات الخارجية 8. هذه الشروط هي مصطنعة وتختلف في الجسم الحي </eم> المكروية، ذلك لأنها تفتقر إلى منافذ 3D الخلوية وكشف خلايا لتركيزات عالية بشكل غير طبيعي خلوى التي يمكن أن تؤدي إلى التمايز وخسارة 9،10 تعدد القدرات.
هنا، نقدم رواية نخاع العظام 3D منظومة الثقافة التي تحاكي البيئة في الجسم الحي، وتدعم نمو 3D multilineage تكون الدم في غياب عوامل النمو الخارجية. السقالة المسامية العالية المستخدمة في هذا النظام مصنوعة من البولي (بو)، ويسهل عالية الكثافة نمو الخلايا عبر مساحة محددة أعلى من ثقافة أحادي الطبقة التقليدية في 2D 11. وأوضحت أن عملنا هذا النموذج دعم نمو دم الحبل السري البشري (CB) خلايا وحيدات النوى (متعددة الجنسيات) 12 وخلايا اللوكيميا الأولية في غياب السيتوكينات الخارجية. هذا التقليد الأعمى 3D رواية توفر منصة قابلة للتطبيق لتطوير نموذج تجريبي لدراسة الإنسان تكون الدم واكتشاف علاجات جديدة لسرطان الدم.
وبحكم ثقافة 3D فيفو نظام المقدمة هنا تمكننا من تأسيس تقليد الطبيعة 3D من تكون الدم الذي يلخص بنية الأصلي BM والنمط الظاهري الخلوية مستقل من السيتوكينات الخارجية. نموذج 3D يوفر هيكل والمكروية التي تمكن الخلايا المكونة للدم العادية وغير العادية لتتكاثر في ظروف م…
The authors have nothing to disclose.
وقد تم تمويل هذا العمل من قبل الصندوق توماس ريتشارد سرطان الدم، وشركة تاتا ميموريال سيدة الثقة، والثقة مستشفى نورثويك بارك صندوق أبحاث سرطان الدم والمعهد الوطني للبحوث الصحية (NIHR)، المملكة المتحدة.
Name of the reagent | Company | Catalogue No |
Dioxan | Invitrogen | D20,186-3 |
PBS | Gibco | 14190-094 |
IMDM | Invitrogen | 12440-053 |
Ficoll-Paque | GE Healthcare | 17-1440-02 |
Penicillin/Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 |
MTS | Promega | G3580 |
Glutaraldehyde | Fluka Biochemika | 49624 |
Wright-Giemsa | Sigma-Aldrich | WG32 |
Fetal bovine serum | Gibco | 10108-165 |
CD71 | Santa Cruz Biotechnology | sc-32272 |
Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11001 |
CD45-FITC | BD Pharmigen | 74895 |
CD71-PE | BD Pharmigen | 555537 |
CD235a-PE-Cy5 | BD Pharmigen | 555570 |
Sodium azide | Sigma-Aldrich | S-8032 |