正常と異常ヒト造血のex vivoでの擬態
Summary
造血のための3D培養系は、ヒト臍帯血および白血病骨髄細胞を用いて記述されています。方法は、細胞外マトリックスタンパク質でコーティングされた多孔質のポリウレタン合成足場の使用に基づいています。この足場は、細胞の広い範囲に対応するために適応可能である。
Abstract
造血幹細胞は、血液細胞の形成1を維持するためにユニークな微環境を必要とします。骨髄（BM）は、複雑な3次元（3D）ティッシュ式中、造血である空間的に組織化、細胞微小環境によって制御されているニッチ2-4と呼ばれる。 BMニッチの組織が 正常または悪性BM 5の機能または機能不全のために重要です。したがって、ex vivoでの擬態を用いたin vivo微小環境でのより良い理解は、私たちは、白血病6の分子、細胞と微小環境の決定要因を解明に役立つだろう。
現在、造血細胞のいずれか同種または異種間質細胞との共培養または外因性のサイトカインの8の加算を必要とする2次元（2D）の組織培養フラスコ/ウェルプレート7にin vitroで培養されています。これらの条件は、人工的であり、 生体内での異なる</eM>彼らが3D携帯電話のニッチを欠いており、分化多能性と9,10が失われる可能性が異常に高いサイトカイン濃度に細胞をさらすという点で微小。
ここで、我々 は 、in vivo 3次元成長環境でシミュレートし、外因性成長因子の存在下で多系統造血をサポートして新たな3D骨髄培養系を提示します。ポリウレタン（PU）で作られたこのシステムで使用される非常に多孔性の足場は、2Dの11の従来の単層培養よりも高い比表面積にわたって高密度の細胞増殖を促進します。私たちの仕事は、このモデルはヒト臍帯血（CB）単核細胞（MNC）外因性のサイトカインの存在下で12および主要な白血病細胞の成長を支えたことを示した。この小説の3D擬態は、造血を勉強すると白血病の新しい治療法を探求する人間の実験モデルの開発のための実行可能なプラットフォームを提供します。
Protocol
Discussion
ここで紹介するex vivoでの三次元培養システムは、外因性のサイトカインの元BMアーキテクチャと、細胞の表現型が独立して反復することが造血の3Dバイオミミクリーを確立することを可能にします。 3Dモデルの構造と正常および異常な造血細胞が in vivo で遭遇したと同様の条件で増殖することができます微小環境を提供しています。
高分子足場材料の…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、リチャード·トーマス白血病基金、レディタタメモリアルトラスト、ノースウィックパーク病院の白血病研究基金と保健研究（NIHR）の国立研究所、英国によって資金を供給された。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue No |
| Dioxan | Invitrogen | D20,186-3 |
| PBS | Gibco | 14190-094 |
| IMDM | Invitrogen | 12440-053 |
| Ficoll-Paque | GE Healthcare | 17-1440-02 |
| Penicillin/Streptomycin | Sigma-Aldrich | P4333 |
| MTS | Promega | G3580 |
| Glutaraldehyde | Fluka Biochemika | 49624 |
| Wright-Giemsa | Sigma-Aldrich | WG32 |
| Fetal bovine serum | Gibco | 10108-165 |
| CD71 | Santa Cruz Biotechnology | sc-32272 |
| Alexa Fluor 488 | Invitrogen | A11001 |
| CD45-FITC | BD Pharmigen | 74895 |
| CD71-PE | BD Pharmigen | 555537 |
| CD235a-PE-Cy5 | BD Pharmigen | 555570 |
| Sodium azide | Sigma-Aldrich | S-8032 |
References
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