Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von Endothelial Kolonie-bildenden Zellen aus humanem Nabelschnurblut
Summary
Endothelial Kolonie-bildenden Zellen (ECFCs) im Umlauf Endothelzellen mit robusten klonale proliferative Potential zeigen, dass intrinsische<em> In-vivo-</em> Gefäß bildet Fähigkeit. Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von Auswuchs Endothelzellen aus CB abgeleitet sind wichtig zur Identifizierung und Isolierung<em> Bona fide</em> ECFCs für mögliche klinische Anwendung bei der Reparatur von beschädigtem Gewebe.
Abstract
Langjährige Blick auf die Bildung neuer Blutgefäße durch Angiogenese, Vaskulogenese und Arteriogenese wurden vor kurzem 1 bewertet. Die Anwesenheit von zirkulierenden endothelialen Vorläuferzellen (EPCs) wurden erstmals im erwachsenen menschlichen peripheren Blut von Asahara et al. In 1997 2 bringt eine Infusion von neuen Hypothesen und Strategien für die vaskuläre Regeneration und Reparatur. EPCs sind selten, aber normale Bestandteile des zirkulierenden Blutes, dass die Heimat von Seiten der Bildung von Blutgefäßen oder vaskuläre Remodeling, und erleichtern Sie entweder postnatalen Vaskulogenese, Angiogenese, Arteriogenese oder zum größten Teil über parakrine Stimulation der bestehenden Gefäßwand-Zellen abgeleitet sind 3. Keine spezifische Marker zu identifizieren, einen EPC identifiziert wurde, und zur Zeit der Zustand des Feldes ist es, dass zahlreiche Zelltypen, einschließlich proangiogenen hämatopoetischen Stamm-und Vorläuferzellen zu verstehen, zirkulierenden angiogenen Zellen, Tie2 + Monozyten, myeloischen Vorläuferzellen cells, Tumor-assoziierte Makrophagen und aktivierten Makrophagen M2 bei der Stimulierung der angiogenen Prozess in verschiedenen präklinischen Tiermodellsystemen und beim Menschen in zahlreichen Erkrankungen 4, 5 teilnehmen. Endothelial Kolonie-bildenden Zellen (ECFCs) sind selten zirkulierenden lebensfähigen Endothelzellen durch robuste klonale Proliferationspotential, sekundäre und tertiäre Koloniebildungsfähigkeit auf Wiederplattieren und Fähigkeit zur Bildung von Gefäßen in vivo nach der Transplantation intrinsischen in immundefizienten Mäusen 6-8, dadurch gekennzeichnet. Während ECFCs wurden erfolgreich aus dem peripheren Blut von gesunden erwachsenen Probanden, Nabelschnurblut (CB) von gesunden Neugeborenen und Gefäßwand von zahlreichen menschlichen arteriellen und venösen Gefäße 6-9 isoliert, besitzt CB die höchste Frequenz von 7 ECFCs dass Display die robusteste klonale proliferative Potenzial und Form robuste und funktionelle Blutgefäße in vivo 8, 10-13. Während die AbleitungECFC aus adulten peripheren Blut wurde 14, 15 vorgestellt, hier haben wir die Methoden für die Ableitung beschreiben, Klonen, Expansion und in vitro sowie in vivo Charakterisierung ECFCs aus der humanen Nabelschnur CB.
Protocol
Discussion
Phänotypische und funktionelle Charakterisierung von putativen endothelialen Vorläuferzellen ist wichtig, die bona fide ECFCs die in der Lage klonal und seriell Re-Beschichtung in der Kultur zu identifizieren sind und führen zu langlebigen und funktionellen implantierbare Blutgefäße in vivo. Menschlichem Nabelschnurblut ist mit ECFCs und der Konzentration dieser zirkulierenden Zellen sinkt mit dem Altern oder Krankheiten 10 angereichert. Neuere Studien legen nahe, dass ECFC kann eine wi…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Dr. Yoder ist Berater für EndGenitor Technologies, Inc. und Mitglied des Board of Rimedion Technologies, Inc.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
| Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
| Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
| TrypLE express | Gibco | 12605 |
| Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
| FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
| hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
| hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
| hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
| hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
| hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
| hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
| Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
| Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
| Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
| Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
| 0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
| Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
| Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
| IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
| Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
| Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |
References
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