توصيف المظهري والوظيفي للخلايا غشائي مستعمرة تشكيل المستمدة من الإنسان دم الحبل السري
Summary
الخلايا البطانية التي تشكل مستعمرة (ECFCs) تنتشر الخلايا البطانية مع احتمال قوي التكاثري نسيلي التي تعرض جوهري<em> في الجسم الحي</em> سفينة تشكيل القدرة. التوصيف المظهري والوظيفي للخلايا البطانية ثمرة المستمدة من CB مهمة لتحديد وعزل<em> حسن النية</em> ECFCs لتطبيق السريرية المحتملة في إصلاح الأنسجة التالفة.
Abstract
وقد تم منذ فترة طويلة وجهات النظر من جديد في الدم تشكيل السفينة عبر الأوعية الدموية، تكون الأوعية، وتخلق الشرايين مؤخرا بمراجعة 1. وحددت لأول مرة وجود تعميم الخلايا الاولية البطانية (EPCs) في الدم المحيطي الإنسان من قبل الكبار اساهارا وآخرون. في 1997 2 جلب ضخ فرضيات واستراتيجيات جديدة للتجديد وإصلاح الأوعية الدموية. EPCs هي مكونات طبيعية نادرة ولكن لتعميم الدم التي تضم مواقع لتكوين الأوعية الدموية أو إعادة تشكيل الأوعية الدموية، وتسهيل إما تكون الأوعية بعد الولادة، الأوعية الدموية، أو تخلق الشرايين الى حد كبير عن طريق تنشيط نظير الصماوي من جدار الوعاء الدموي القائم الخلايا المشتقة 3. لم يتم التعرف على علامة محددة لتحديد هوية EPC، وفي الوقت الحاضر حالة الحقل هو أن نفهم أن العديد من أنواع الخلايا الجذعية المكونة للدم بما في ذلك proangiogenic والخلايا الاولية، تعميم خلايا عائية، Tie2 + حيدات، النخاعي سل سلفليرة سورية، ورم الضامة المرتبطة بها، وM2 الضامة تنشيط المشاركة في حفز عملية عائية في مجموعة متنوعة من قبل السريرية نظم نموذج الحيوان والإنسان في المواد الدراسية في الحالات المرضية العديدة 4، 5. الخلايا البطانية التي تشكل مستعمرة (ECFCs) هي المتداولة قابلة للحياة نادرة الخلايا البطانية التي تتميز محتمل قوي التكاثري نسيلي، مستعمرة والثانوي والعالي تشكيل القدرة على replating، والقدرة على تكوين جوهري في أوعية الجسم الحي على زرع في الفئران العوز المناعي 6-8. في حين تم عزل ECFCs بنجاح من الدم المحيطي من المواضيع البالغين الأصحاء، دم الحبل السري (CB) للأطفال حديثي الولادة الأصحاء، وجدار الوعاء الدموي من السفن الإنسان العديد من الشرياني والوريدي 6-9، CB تمتلك أعلى تردد من ECFCs 7 أن العرض في أقوى المحتملة التكاثري نسيلي وشكل الأوعية الدموية الدائم وظيفية في الجسم الحي 8، 10-13. في حين أن اشتقاقوقد قدم ECFC من الدم المحيطي الكبار 14 و 15، ونحن هنا وصف منهجيات والاشتقاق، والاستنساخ، والتوسع، وفي المختبر وكذلك في توصيف المجراة من ECFCs من CB السري الإنسان.
Protocol
Discussion
التوصيف المظهري والوظيفية من المفترض الخلايا الاولية البطانية من المهم التعرف على ECFCs حسن النية التي هي قادرة على clonally متسلسل وإعادة الطلاء في الثقافة، وتؤدي إلى دائم والأوعية الدموية وظيفية للزرع في الجسم الحي. وأثرى البشرية دم حبل السرة مع ECFCs وتركز هذه ا…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
الدكتور يودر هو استشاري لتقنيات EndGenitor، المؤتمر الوطني العراقي وعضو في مجلس إدارة شركة Rimedion، تقنيات
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Heparin Sodium Injection, USP | APP Pharmaceuticals | 504031 |
| Ficoll-Pague | Amersham Biosciences | 17-1440-03 |
| Mixing cannula | Maersk Medical | 500.11.012 |
| EGM-2 | Lonza | CC-3162 |
| Defined FBS | Hyclone | SH30070.03 |
| TrypLE express | Gibco | 12605 |
| Rat type I collagen | BD Biosciences | 354236 |
| Matrigel | BD Biosciences | 356234 |
| FcR Block | Miltenyi Biotech | 130-059-901 |
| hCD31, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555445 |
| hCD45, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555482 |
| hCD14, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555397 |
| hCD144, PE conjugated | eBioscience | 12-1449-80 |
| hCD146, PE conjugated | BD Pharmingen | 550315 |
| hCD105, PE conjugated | Invitrogen | MHCD10504 |
| Ms IgG1,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555748 |
| Ms IgG1,k antibody, PE conjugated | BD Pharmingen | 559320 |
| Ms IgG2a,k antibody, FITC conjugated | BD Pharmingen | 555573 |
| Anti-human CD31 | Dako | clone JC70/A |
| Anti-mouse CD31 | BD Pharmingen | 553370 |
| 0.22-μm vacuum filtration system | Millipore | SCGPU05RE |
| Glacial acetic acid, 17.4N | Fisher | A38-500 |
| Antibiotic-Antimycotic | Invitrogen | 15240-062 |
| Fetal bovine serum (FBS) | Hyclone | SH30070.03 |
| IHC Zinc Fixative | BD Biosciences | 550523 |
| Sytox green reagent | Invitrogen | S33025 |
| Cloning cylinders, sterile | Fisher Scientific | 07-907-10 |
References
- Carmeliet, P., Jain, R. K. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis. Nature. 473, 298-307 (2011).
- Asahara, T. Isolation of putative progenitor endothelial cells for angiogenesis. Science. 275, 964-967 (1997).
- Urbich, C., Dimmeler, S. Endothelial progenitor cells: characterization and role in vascular biology. Circ. Res. 95, 343-353 (2004).
- Critser, P. J., Voytik-Harbin, S. L., Yoder, M. C. Isolating and defining cells to engineer human blood vessels. Cell. Prolif. 44, 15-21 (2011).
- Matthias, M., David, N., Josef, N. From bench to bedside: what physicians need to know about endothelial progenitor cells. Am. J. Med. 124, 489-4897 (2011).
- Ingram, D. A. Vessel wall-derived endothelial cells rapidly proliferate because they contain a complete hierarchy of endothelial progenitor cells. Blood. 105, 2783-276 (2005).
- Ingram, D. A. Identification of a novel hierarchy of endothelial progenitor cells using human peripheral and umbilical cord blood. Blood. 104, 2752-2760 (2004).
- Yoder, M. C. Redefining endothelial progenitor cells via clonal analysis and hematopoietic stem/progenitor cell principals. Blood. 109, 1801-1809 (2007).
- Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Animal Serum Free Expansion of Human Umbilical Cord Derived Mesenchymal Stromal Cells (MSCs) and Endothelial Colony Forming Progenitor Cells (ECFCs. J. Vis. Exp. (32), e1525 (2009).
- Au, P. Differential in vivo potential of endothelial progenitor cells from human umbilical cord blood and adult peripheral blood to form functional long-lasting vessels. Blood. 111, 1302-135 (2008).
- Critser, P. J., Kreger, S. T., Voytik-Harbin, S. L., Yoder, M. C. Collagen matrix physical properties modulate endothelial colony forming cell-derived vessels in vivo. Microvasc. Res. 80, 23-30 (2010).
- Melero-Martin, J. M. Engineering robust and functional vascular networks in vivo with human adult and cord blood-derived progenitor cells. Circ. Res. 103, 194-202 (2008).
- Melero-Martin, J. M. In vivo vasculogenic potential of human blood-derived endothelial progenitor cells. Blood. 109, 4761-4768 (2007).
- Hofmann, N. A., Reinisch, A., Strunk, D. Isolation and Large Scale Expansion of Adult Human Endothelial Colony Forming Progenitor Cells. J. Vis. Exp. (32), e1524 (2009).
- Lin, Y., Weisdorf, D. J., Solovey, A., Hebbel, R. P. Origins of circulating endothelial cells and endothelial outgrowth from blood. J. Clin. Invest. 105, 71-77 (2000).
- Witting, S. R. Efficient Large Volume Lentiviral Vector Production Using Flow Electroporation. Hum. Gene. Ther. , (2011).
- Yoon, C. H. Synergistic neovascularization by mixed transplantation of early endothelial progenitor cells and late outgrowth endothelial cells: the role of angiogenic cytokines and matrix metalloproteinases. Circulation. , 112-1618 (2005).
- Dubois, C. Differential effects of progenitor cell populations on left ventricular remodeling and myocardial neovascularization after myocardial infarction. J. Am. Coll. Cardiol. 55, 2232-2243 (2010).
- Medina, R. J., O’Neill, C. L., Humphreys, M. W., Gardiner, T. A., Stitt, A. W. Outgrowth endothelial cells: characterization and their potential for reversing ischemic retinopathy. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 51, 5906-5913 (2010).
