BLT人性化的鼠标使用一个基于干细胞的基因治疗肿瘤模型的建立
Summary
这里描述的是使用人源化小鼠的肿瘤特异性T细胞的产生和表征。人胸腺组织和转基因的人类造血干细胞移植到免疫功能低下小鼠。这将导致在一个精心设计的人体免疫系统在体内的抗肿瘤免疫反应的检查允许的重组。
Abstract
如老鼠的小动物模型已被广泛用于研究人类疾病和开发新的治疗干预措施。尽管从这些研究中获得的大量信息，别具特色的种属特异性的病毒引起的疾病，如人类免疫缺陷病毒（HIV）感染小鼠免疫功能以及人性化的小鼠模型的发展。早期型号使用C. B 17 SCID / SCID小鼠体内移植的人胎胸腺，胎肝称为你的/ LIV（SCID-胡）1，2或过继的人外周血白细胞（SCID-huPBL ）3。这两种型号，主要用于HIV感染的研究。
这两种模式的主要限制之一是缺乏稳定的重建人体免疫细胞的外围，使他们更有关生理模型来研究HIV疾病。为此，BLT嗡嗡声anized小鼠模型的开发。 BLT代表骨髓/肝/胸腺。在这个模型中，6〜8周老NOD.Cg Prkdcscid Il2rgtm1Wjl / SZJ（NSG）免疫功能低下小鼠收到你的/ LIV植入的SCID-hu的小鼠模型，但随后第二次人类造血干细胞移植4。这个系统的优点是在外围人体免疫系统的完整的重组。这个模型已被用于研究艾滋病病毒感染者和潜伏期5-8。
我们已经产生了一个修改后的版本，这个模型中，我们使用转基因造血干细胞（HHSC）构建你 的/ LIV植入的自体注射转HHSC的7,9。这种方法会导致产生的转基因谱系。更重要的是，我们适于此系统，以检查表达黑素瘤特异性T细胞受体的功能性细胞毒性T细胞（CTL）产生的电位。使用这个模型，我们能够评估我们的转基因CTL利用的现场正电子发射断层扫描（PET）成像，以确定肿瘤消退（9）的功能。
此协议的目的是描述的过程中，这些转基因小鼠，用活PET成像在体内的疗效和评估。作为一个说明，因为我们使用的人体组织和慢病毒载体，我们的设施符合CDC美国国立卫生研究院生物安全2级（BSL2）的指引，有特殊的预防措施（BSL2 +）。此外，核供应国集团的小鼠有严重免疫功能低下，因此，他们的住房和维护必须符合最高的健康的标准（ http://jaxmice.jax.org/research/immunology/005557-housing.html ）。
Protocol
Representative Results
Discussion
加上在体内的 PET成像BLT人性化的小鼠模型研究人类慢性疾病的有力工具。该系统以BLT小鼠模型及垫款超出限定范围为艾滋病研究。此外，它是一个伟大的系统中，我们可以研究各种基因治疗方案以及诊断技术，才可以达到临床上。后者成本低，再加上利用老鼠与灵长类动物，这是一个非常有用的模型。
PET成像技术使我们能够评估我们的方法的疗效。如果我们完全依赖…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们要感谢阿尔文·韦尔奇和拉里·庞的技术援助。这项工作是由部分由美国国立卫生研究院（NIH）奖P50 CA086306，加州再生医学研究所（CIRM）补助RC1-00149-1和RS1-00203-1 CIRM新进教师奖RN2-00902-1 ，加州理工学院，加州大学洛杉矶分校联合转化医学中心，加州大学洛杉矶分校艾滋病研究中心（CFAR）NIH / NIAID AI028697，加州大学洛杉矶分校艾滋病研究所，CIRM工具和技术奖RT1-01126，和加州大学多校区研究计划和计划从加利福尼亚州中心抗病毒药物的发现（数量MRPI 143226）。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| PBS | Invitrogen | 10010049 | |
| RPMI 1640 | A1049101 | ||
| Iscove’s | 12440061 | ||
| Fetal Calf Serum | 16000085 | ||
| Collagenase type IV | Sigma Aldrich | C5138 | |
| Hyaluronidase | H3506 | ||
| DNAse I | Roche Diagnostics | 10104159001 | |
| Piptazo (Zosyn) | Pfizer | Piperacillin/tazobactam combination | |
| Ficoll (Ficoll-Paque Plus) | Ge Healthcare Life Sciences | 17-1440-02 | |
| MACS Buffer | Miltenyi Biotech | See comments | MACS buffer: PBS supplemented with 0.5% fetal bovine serum and 2 mM citrate dextrose formula-A |
| CD34 Microbead Kit | 130-046-702 | ||
| LS Columns | 130-042-401 | ||
| Retronectin | Takara | T100A | |
| Matrigel | BD Biosciences | 354263 | |
| Isofluorane | Baxter | http://www.baxter.com/healthcare_professionals/products/forane.html | |
| Carprofen (Rimadyl) | Pfizer Animal Health | https://www.rimadyl.com/default.aspx |
References
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