ゼブラフィッシュ胚の脳室の手動排水
Summary
我々は、脳脊髄液（CSF）を収集し、ゼブラフィッシュ胚の脳室系内のCSFを欠いてシステムを作成する方法を提案する。これは、胚の脳の発達中に脳脊髄液の組成とその要件の精査が可能になります。
Abstract
脳脊髄液（CSF）は脳室内に含まれるタンパク質に富む流体である。これは初期の脊椎動物の胚発生時に存在しており、生涯にわたって持続します。アダルトCSFは、脳を和らげる廃棄物を削除して、分泌される分子の1,2を運ぶと考えられている。成人と高齢胚では、CSFの大半は脈絡叢、脳の脳室3から5に隣接して位置する高度に血管分泌領域のシリーズが作られています。ゼブラフィッシュでは、脈絡叢が完全に144時間後に受精（HPF）6が形成されている。これに先立ち、マウスを含むゼブラフィッシュや他の両方の脊椎動物の胚では、胚CSF（eCSF）かなりの量が存在しています。ひよこのこれらのデータと研究は神経上皮は、開発の早い段階で分泌され、前脈絡叢開発7〜eCSFの主要な源であることが示唆された。
eCSFは約3倍以上のタンパク質トンが含まれていますそれが発展8,9時に重要な役割を持っている可能性が示唆された漢成人CSF、。ニワトリとマウスでの研究はeCSF、流体圧力、またはこれらの組み合わせで分泌された因子は、神経上皮10月20日における神経発生、遺伝子発現、細胞増殖、細胞生存のために重要であることを実証している。ヒト、ラット、マウス、ニワトリeCSFのプロテオーム解析は、CSFの機能のために必要があるかもしれない多くのタンパク質を同定した。これらは、細胞外マトリックス成 分、アポリポタンパク質、タンパク質を浸透圧調節、細胞死と増殖の21から24に関与するタンパク質を含む。しかし、eCSFの複雑な機能は不明な点が多い。
その結果、私たちはeCSFコンポーネントの識別のために、開発中のeCSF要件の分析が可能になり、ゼブラフィッシュの脳室からeCSFを除去するための方法を開発しました。もっとeCSFは他の脊椎動物システムワットから収集することができますがi番目の大きい胚、eCSFは、ゼブラフィッシュの開発の初期段階から収集され、異常な脳室の容積や形態につながる遺伝的または環境条件の下ですることができます。 eCSFの取り外しおよびコレクションは質量分析、eCSF機能の調査、およびアッセイに心室にselect into要因の再導入、それらの機能を可能にします。したがって、初期のゼブラフィッシュ胚のアクセシビリティは開発中eCSF機能の詳細な分析を可能にする。
Protocol
1。マイクロインジェクション針とセルトラムの準備製造元の指示に従って、ミネラルオイルをエッペンドルフCellTramオイルマイクロインジェクター装置を記入してください。 サッター楽器ニードルプラーを使用してキャピラリーチューブを引いて、マイクロインジェクション針を準備します。 エッペンドルフCellTramに接続マニピュレーターに針を取り付けます。 …
Representative Results
排水脳室の例を図1B-Cに示されている。彼らはeCSF（C対図1B）を欠いているように脳室は折りたたまれています。背側の画像に見られるように（ 図1B-C、および図2A-D）後脳の神経上皮は、その特徴的な形態を保持しないと堅牢なヒンジ点に起因する可能性が高いeCSFの欠如にもかかわらず、開いていると思われる。しかし、横方向のビュー（ <str…
Discussion
手動でゼブラフィッシュ脳室からeCSFを排出するために、この手法を使用するには、開発中にeCSFのための要件を決定するために有用であろう。また、この技術は、胚発生の過程でeCSFタンパク質プロファイルの説明をできるようになります。この時間の間に種々のタンパク質の同定は、CSFおよび脳の発達の間にその潜在的な役割の機能にさらに調査を可能にするでしょう。 amniotesで、eCSF（IGF2?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、国立精神衛生研究所、国立科学財団によってサポートされていました。博士ジェンGutzman博士アマンダ·ディッキンソン、多くの有用な議論や建設的な批判のための他のSive研究室のメンバーに、専門家の魚飼育用のオリビエPaugoisのおかげで、特別です。
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue number |
| Eppendorf CellTram Oil | Eppendorf | 516 000.025 |
| Mineral Oil | Sigma | M8410 |
| Tricaine powder | Sigma | A5040 |
| Capillary Tubes | FHC Inc. | 30-30-1 |
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Citer Cet Article
Chang, J. T., Sive, H. Manual Drainage of the Zebrafish Embryonic Brain Ventricles. J. Vis. Exp. (70), e4243, doi:10.3791/4243 (2012).