Summary

成長中の軸索に沿ってマウスのシュワン細胞の発達を分析する

Published: November 21, 2012
doi:

Summary

ここでは、SCが伸びる軸索に沿って開発することができますているシュワン細胞(SC)の遊走アッセイを記述します。

Abstract

末梢神経の開発は魅力的なプロセスです。ニューロンはヒトで100以上の30cm離れニューロンの細胞体からしばしば具体的な目標を、支配する軸索を送る。開発中の神経細胞の生存は、対象由来成長因子でなく、シュワン細胞(SCS)のサポートに依存します。この目的を達成するために神経細胞体の地域(または中枢から末梢神経系への移行)のSC ensheath軸索シナプスや神経筋接合部へ。シュワン細胞は神経堤の誘導体であり、全体の軸索は、SCSで覆われるまで、新興の軸索に沿って前駆体として移行されます。これは、末梢神経系の開発のためのSCの移行の重要性を示しており、このプロセスを調査する必要性を強調している。 SCの発展を分析するために、設定も移行のためのそれらの生理学的基質、軸索を含むSCの隣に必要とされる。子宮内の開発による<emは>生体タイムラプスイメージングでは、しかし、マウス( ハツカネズミ )のような胎盤の脊椎動物には不可能である。これを回避するために、我々は上頸神経節(SCG)植技術を適応した。神経成長因子(NGF)を用いた治療に基づいたSCG外植片は神経節から周囲に軸索に沿って移行SCの前駆続いて軸索を伸ばす。このシステムの利点は、SCが内因性SCのプールから、それらが同時に成長している自分自身の生理的な軸索に沿って移行することに由来していることです。軸索に沿ってSCの開発がSCの移行についての洞察を得るために更なる可能性を開いて、タイムラプスイメージングによって解析することができるので、このシステムは、特に興味をそそられる。

Protocol

1。コラーゲンゲルの調製 455μlの10倍、MEM、112μlの7.5パーセントのNaHCO 3、50μlのグルタミンおよびNaOHを含む、株式媒体を準備します。濃度とNaOHの量は、ラット尾コラーゲン製剤(1.2参照)、1,000μlのある株式媒体の最終容量に依存します。 Ebendal(1)に記載のラット尾部コラーゲンを準備します。 4℃のコラーゲン溶液を保存コラーゲン溶液の劣化を観察?…

Representative Results

軸索の成長は、NGF(4)(映画スキームS1は図1方式)を用いた治療により植片をSCGから促進される。このプロセスは、倒立顕微鏡で簡単に表示され、タイムラプスイメージング(ムービーS2)を続けることができます。科学者がマウス胚からSCGを解剖で新たに追加された場合、我々は強くシンプルな抗チロシンヒドロキシラーゼ(TH)免疫組織化学によって手法の妥当?…

Discussion

末梢神経系の発達は、エキサイティングなプロセスです。開発が完了すると、軸索は、ヒトでは、多くの場合100 cm以上であることができます全体の長さに沿って、SCSによってensheathedされています。この目的を達成するために必要なSCの正しい数はまた、完全な軸索のカバレッジを確保するため、周囲に伸びる軸索に沿って移動しなければならない開発およびSCの間に確立されてきました。こ?…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

私たちは、優れた技術支援のためにコラーゲンプロトコルとユッタ·フェイとウルスラヒンツを共有するためのUrmas Arumaeに感謝したいと思います。さらに我々は親切にビデオshotingのヘルプのためにクリスチャン·F·アッカーマン、ウルリケ·エンゲルとハイデルベルク大学のニコンイメージングセンターともヨアヒムキルシュに感謝したいと思います。研究の一部はドイツ学術振興(SFB 592)を通じて資金を供給された。

Materials

Name of Reagent/Material Company Catalogue Number Comments
10x MEM Gibco 21430
Sodium Bicarbonate (7.5%) Gibco 25080
Glutamine Gibco 25030
NaOH Merck 109137
NGF Roche 1058231 R&D#556-NG-100
Neurobasal Medium Gibco 21103
B27 Supplement Gibco 17504
antibiotics Gibco 15640
d-PBS Gibco 14040
insect needles FST 26002-20
syringe needle Braun BD # 300013
8 well chamber slide Lab tek 177402

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Citer Cet Article
Heermann, S., Krieglstein, K. Analyzing Murine Schwann Cell Development Along Growing Axons. J. Vis. Exp. (69), e50016, doi:10.3791/50016 (2012).

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