新生儿脑室下区电穿孔
Summary
我们展示出一种微创技术，新生儿脑室下区电。该技术包括新生幼崽的侧脑室注射质粒DNA和通电时提供神经干细胞和基因操纵
Abstract
神经干细胞（NSCs）线的产后侧脑室，并产生多种细胞类型，包括神经元，星形胶质细胞和室管膜细胞。了解，利用其独特的修复潜力更好地理解大脑和中枢神经系统紊乱的分子通路的负责NSC的自我更新，承诺和分化是至关重要的。往前哺乳动物系统操纵的方法需要耗费时间和昂 贵的基因工程的努力在整个动物的第2级。因此，绝大多数研究探讨NSC分子在体外或在无脊椎动物中的功能。
在这里，我们展示了技术操作简单，快速的新生儿的NPC，被称为新生儿脑室下区（SVZ）电。十年前制定类似的技术来研究胚胎神经干细胞，并资助研究cortical开发3,4。最近研究产后的啮齿动物前脑5-7。这种技术的结果SVZ神经干细胞在强大的标签和他们的后代。因此，产后SVZ电哺乳动物国科会基因工程提供了成本和时间效益的替代方案。
Protocol
本程序是在按照与耶鲁IACUC要求。科学家应确保IACUC准则的批准，随后根据其机构的要求。 1。第1节。制备DNA，解决方案和玻璃吸管生成高纯度（OD 260/280> 1.80），高浓度（微克/微升> 2.5）内毒素的DNA。 准备0.9％的生理盐水溶液和无菌过滤器，通过一个22微米的过滤器。 将10厘米火抛光的高硼硅玻璃毛细管（OD：1.5毫米，1.10毫米）到一个模型中PP-830成?…
Representative Results
新生儿脑室下区电在几乎所有的放射状胶质连续的背，背外侧和侧脑室下区继“清扫”运动的镊子电极（ 图1E）的标签。然而，电可定制的要求，在各自的实验，但不扫电极，并使用特定的位置和方向，详细的视频。例如，由于背侧局部放射状胶质不同于那些衬心室的横向部分，一个可以选择只有一个单一的区域9,10 electroporate。更多特殊性的也可以使用较小的电极。 <p clas…
Discussion
在这里，我们详细新生儿SVZ电的技术，这种技术能够迅速和有力的标记和操作SVZ干细胞和它们的后代。有几个优点，在与其它技术相比，电穿孔具有。首先，考虑的重点标记的细胞，一个是能分辨细胞自主和非细胞自主的影响。其次，使用诱导系统的遗传操作，允许一个用来比较的效果之前或之后突触融合。此外，人们可以绕过使用多个质粒与含有loxP位点的质粒通过电穿孔CRE表达小鼠。第四，报…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由国防部（理念发展奖，W81XWH-10-1-0041，AB），CT干细胞补助金（AB），和国立健康NRSA 10668225（DMF）的补助金。本发明的材料的基础工作部分由康涅狄格州的支持下，康涅狄格干细胞研究资助计划。它的内容是完全的责任作者的观点，并不一定代表国家的康涅狄格州，康涅狄格州或CT创新公共健康部的官方意见，公司的资助者不参与研究设计，数据收集分析，决定，公布，或准备的稿子。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Heavy Polished Borosilicate Tubing | Sutter Instrument | BF150-110-10 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | Narishige | PC-10H | |
| Fast Green | Fischer Scientific | 0521192205 | |
| ECM 830 Square Wave Pulse generator | Harvard Apparatus | 45-0052 | |
| Tweezertrodes | Harvard Apparatus | 45-0488 | |
| Fiber-Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Tungsten Halogen lamp | USHIO America, Inc | 1002247 | |
| Picospritzer II | Parker Instruments | 052-0312-900 |
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Citer Cet Article
Feliciano, D. M., Lafourcade, C. A., Bordey, A. Neonatal Subventricular Zone Electroporation. J. Vis. Exp. (72), e50197, doi:10.3791/50197 (2013).