אנחנו מדגימים את טכניקה פולשנית המכונית electroporation האזור subventricular ילוד. הטכניקה מורכבת של הזרקת DNA פלסמיד לתוך חדרי לב לרוחב של גורים ילודים ויישום זרם חשמלי כדי לספק ולתפעל גנטיים תאי גזע עצביים
תאי גזע עצביים (NSCs) קו רוחב חדרי לב לאחר הלידה ולהצמיח סוגי תאים רבים הכוללים נוירונים, האסטרוציטים, ותאי ependymal 1. הבנת המסלולים המולקולריים האחראים למל"ל התחדשות עצמית, מחויב, וההתמיינות היא קריטית לרתימת הפוטנציאל הייחודי שלהם כדי לתקן את המוח ולהבין טובים יותר את הפרעות במערכת עצבים מרכזיות. קודם שיטות למניפולציה של מערכות יונקים נדרשו זמן מאמץ רב ויקר של הנדסה גנטית ברמת החיים השלמה 2. לכן, הרוב המכריע של מחקרים בחן את הפונקציות של מולקולות המל"ל במבחנה או בחסרי חוליות.
הנה, אנחנו מדגימים את הטכניקה הפשוטה ומהירה כדי לתפעל NPCs יילודים המכונה האזור electroporation subventricular יילודים (SVZ). טכניקות דומות פותחו לפני עשור כדי ללמוד NSCs העוברי וסייעו מחקרים על cortical פיתוח 3,4. לאחרונה זה יושם ללמוד המוח הקדמי המכרסם לאחר לידת 5-7. טכניקה זו מביאה לתיוג חזק של SVZ NSCs וצאצאיהם. לפיכך, לאחר לידת SVZ electroporation מספק עלות וזמן חלופי יעילה להנדסה גנטית של יונקי המל"ל.
כאן אנחנו פירוט הטכניקה של electroporation SVZ יילודים, טכניקה במהירות ובאופן עמיד לתייג ולטפל בתאי גזע SVZ וצאצאיהם. ישנם מספר יתרונות שיש electroporation בהשוואה לשיטות אחרות. ראשית, מאחר תיוג המוקד של תאים, אחד הוא מסוגל להבחין סלולריות השפעות אוטונומיות אוטונומיות ולא תא. מניפולצ?…
The authors have nothing to disclose.
עבודה זו נתמכה על ידי מענקים ממשרד ההגנה (פרס פיתוח רעיון, W81XWH-10-1-0041, א.ב.), CT תאי גזע המענק (א.ב.), והמכון לאומי לבריאות NRSA 10668225 (DMF). החומר זה מבוסס על העבודה הנתמכת בחלקו על ידי מדינת קונטיקט במסגרת התכנית לקונטיקט לתאי הגזע למחקר המענקים. התוכן שלה הוא באחריות בלעדית של הכותבים ואינם מייצג בהכרח את עמדתה הרשמית של מדינת קונטיקט, המחלקה לבריאות ציבור של מדינת קונטיקט או CT חידושים, Inc הממנים לא היו כל תפקיד בתכנון מחקר, איסוף נתונים וניתוח, החלטה לפרסם, או הכנה של כתב היד.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Heavy Polished Borosilicate Tubing | Sutter Instrument | BF150-110-10 | |
Dual-Stage Glass Micropipette Puller | Narishige | PC-10H | |
Fast Green | Fischer Scientific | 0521192205 | |
ECM 830 Square Wave Pulse generator | Harvard Apparatus | 45-0052 | |
Tweezertrodes | Harvard Apparatus | 45-0488 | |
Fiber-Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
Tungsten Halogen lamp | USHIO America, Inc | 1002247 | |
Picospritzer II | Parker Instruments | 052-0312-900 |