La electroporación neonatal zona subventricular
Summary
Se demuestra una técnica mínimamente invasiva conocida como electroporación neonatal zona subventricular. La técnica consiste en la inyección de ADN de plásmido en los ventrículos laterales de cachorros neonatales y la aplicación de corriente eléctrica para suministrar y manipular genéticamente las células madre neuronales
Abstract
Las células madre neurales (NSC) de la línea de los ventrículos laterales postnatales y dan lugar a múltiples tipos de células que incluyen neuronas, astrocitos y células ependimarias 1. La comprensión de los mecanismos moleculares responsables de la NSC auto-renovación, el compromiso y la diferenciación es fundamental para el aprovechamiento de su potencial único para reparar el cerebro y entender mejor los trastornos del sistema nervioso central. Los métodos anteriores para la manipulación de los sistemas de mamíferos requiere el esfuerzo largo y costoso de la ingeniería genética a nivel animal entero 2. Por lo tanto, la gran mayoría de los estudios han examinado las funciones de las moléculas NSC in vitro o en los invertebrados.
Aquí se demuestra la técnica simple y rápida para manipular NPCs neonatales que se conoce como zona neonatal subventricular (SVZ) electroporación. Técnicas similares se han desarrollado hace una década para estudiar NSCs embrionarias y han ayudado a los estudios sobre Cortical desarrollo 3,4. Más recientemente, este fue utilizado para estudiar el cerebro anterior roedor postnatal 5-7. Esta técnica da como resultado el etiquetado robusto de SVZ NSCs y su progenie. Por lo tanto, postnatal SVZ electroporación ofrece una alternativa costo y tiempo efectivo de mamíferos ingeniería genética NSC.
Protocol
Representative Results
Discussion
Aquí detalle la técnica de electroporación SVZ neonatal, una técnica para etiquetar rápidamente y con firmeza y manipular células SVZ madre y su progenie. Hay varias ventajas que la electroporación tiene en comparación con otras técnicas. En primer lugar, dado el etiquetado focal de células, uno es capaz de discernir celulares autónomos efectos autónomos y no por células. Segunda manipulación, genética utilizando sistemas inducibles permite comparar los efectos antes o después de la integración sinápti…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por subvenciones del Departamento de Defensa (Premio Idea desarrollo, W81XWH-10-1-0041, AB), CT con células madre subvención (AB), y el Instituto Nacional de Salud NRSA 10668225 (DMF). El presente material está basado en trabajo apoyado en parte por el Estado de Connecticut bajo el Stem Cell Research Connecticut Programa de Subvenciones. Su contenido es de exclusiva responsabilidad de sus autores y no representan necesariamente la opinión oficial del Estado de Connecticut, el Departamento de Salud Pública del Estado de Connecticut o innovaciones CT, Inc. Los financiadores no participó en el diseño del estudio, recogida de datos y el análisis, la decisión de publicar, o la preparación del manuscrito.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| Heavy Polished Borosilicate Tubing | Sutter Instrument | BF150-110-10 | |
| Dual-Stage Glass Micropipette Puller | Narishige | PC-10H | |
| Fast Green | Fischer Scientific | 0521192205 | |
| ECM 830 Square Wave Pulse generator | Harvard Apparatus | 45-0052 | |
| Tweezertrodes | Harvard Apparatus | 45-0488 | |
| Fiber-Optic Light Source | Fisher Scientific | 12-562-36 | |
| Tungsten Halogen lamp | USHIO America, Inc | 1002247 | |
| Picospritzer II | Parker Instruments | 052-0312-900 |
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