Summary

압력 Myography를 사용 쥐과 저항 동맥의 기능을 평가

Published: June 07, 2013
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Summary

압력 myography에서 혈관의 손상 작은 세그먼트는 두 개의 작은 캐 뉼러에 장착하고 적절한 내강 압력으로 가압. 여기, 우리는 마우스 3의 혈관 이완 반응을 측정하는 방법을 설명<sup> 회</supC57와 sGCα에> 주문 장간막 동맥<sub> 1</sub<sup> – / -</sup> 압력 myography를 사용하여 마우스.

Abstract

압력 myograph 시스템은 작은 동맥의 기능 평가에 절묘하게 유용에 적합한 전층 압력으로 가압. 압력 myography에서 달성 근처 생리적 조건은 혈관 침대의 생체 내 행동을 추정 할 수있는 약물 및 생리적 자극에 고유 반응의 심도 특성을 허용합니다. 압력 myograph은 기존의 와이어 myographs에 비해 여러 가지 장점이 있습니다. 예를 들어, 작은 저항 혈관 엄격하게 제어 및 생리학 관련 강내 압력에서 공부하실 수 있습니다. 여기, 우리는 아세틸 콜린에 대한 응답으로 혈관 이완에 페닐와 preconstricted 3주문 장간막 동맥 (긴 3-4밀리미터)의 기능을 공부합니다. 장간막 동맥은 60 mmHg로 일정한 압력으로 유지되는 압력 및 봉인 시스템에 연결된 두 개의 캐 뉼러에 장착되어 있습니다. 혈관의 루멘 및 외경 continuou 있습니다교활한는 각각 페닐 아세틸 콜린 님의 질문에 답변 혈관 수축과 혈관 이완의 실시간 정량을 허용 비디오 카메라를 사용하여 촬영.

심혈관 질환의 원인을 연구하는 압력 myography의 적용을 설명하기 위해, 우리는 전신 고혈압의 쥐 모델에서 내피 세포 의존적 혈관 기능을 평가 하였다. 수용성 구아닐산의 cyclase의 (- / – sGCα 1)의 α 1 소단위의 결핍 생쥐 때 129S6 (S6) 배경 (sGCα 1 -/-S6)에 고혈압하지만하지 않는 경우 C57BL / 6 (B6) 배경 (sGCα에 1 -/-B6). 압력 myography를 사용하여, 우리는 보여 저해하는 내피 세포 의존적 혈관 이완에 sGCα 1 결핍이 발생합니다. 혈관 장애는 sGCα 1보다 sGCα 1 -/-S6에서 더 뚜렷하다 -/-B6 마우스, 가능성 contributisGCα 1 -/-B6 마우스에 비해 sGCα 1 -/-S6의 높은 혈압 NG.

압력 myography 그로 인하여 심혈관 질환을 기본 메커니즘에 대한 우리의 통찰력을 보강, 혈관 수축과 이완에 다양한 자극의 효과를 평가하는 데 사용할 수있는 비교적 간단하지만, 민감하고 기작 유용한 기술이다.

Introduction

압력 myograph 시스템은 작은 동맥, 정맥 등 혈관의 생리적 기능과 특성을 측정하는 데 사용됩니다. 동맥이나 정맥의 손상 작은 세그먼트는 두 개의 작은 유리 캐 뉼러에 장착하고 용기 생체 특성 (그림 1과 2)에있는 그것의 대부분을 유지할 수 있도록 적절한 내강의 압력으로 가압된다. 압력 myograph에 가까운 생리적 조건은 고립 된 혈관의 고유 특성 (예를 들어, 근원 성 톤)의 조사를 허용, 혈관 침대의 생체 내 행동을 반영합니다. 근육 수축은 힘 센서 1에 직접 기계적 커플 링에 의해 평가되는 와이어 myography, 이상 압력 myography의 장점 중 일부는 반면, 혈관 시스템 개발의 전체 저항을 정의하는 마이크로 저항 동맥, 공부 할 수있는 (I) 포함 와이어 myograph 더 큰 도관 동맥, (ⅱ) t로 제한됩니다더 와이어 (ⅲ) 선박의 자연 형태가 잘 유지되는, 혈관 내강을 통과 할 필요가 없기 때문에 내피 세포를 손상하는 모자의 위험이 감소되고, (IV)는 용기 치수는 폭 넓은 범위에서 공부하실 수 있습니다 압력이나 전단 응력 2.

마이크로 혈관을 공부하는 것은 고혈압과 같은 심혈관 질환의 변형 된 혈관 톤에 기여하는 병태 생리 및 분자 메커니즘을 이해하는 데 도움이 큰 도관 동맥을 공부하는 것보다 더 많은 정보가 될 수 있습니다. 예를 들어, 8 주 동안 쥐에게 고지방식이를 공급과 관련된 내피 세포 기능의 손상이 있지만 대동맥 고리에 2 주문 장간막 동맥 3 (그림 3)에서 설명 될 수있다. 압력 myography의 또 다른 장점은 가압 용기의 본질적인 근원 성 수축이 있는지, 그리고이 현상의 내피 세포의 역할과 기능을 연구 할 수있다. 여기, 우리는 DESCR장애인 산화 질소 (NO) cGMP의 신호의 설정에서 마우스 장간막 3주문 저항 동맥의 혈관 반응성을 연구하는 압력 myograph의 사용을 IBE.

Protocol

1. 용액의 조제 500X EDTA (에틸렌 다이아 민 테트라 초산) 재고 : 500 MG EDTA-나 2 • 2H 2 O의 무게를 50 ML 탈 이온수에 용해. 상온에서 보관하십시오. KCl을이 솔루션을 탈분극. 3.69 g의 NaCl, 18.64 g KCl을, 0.36 g 황산 마그네슘 무수, 0.41 g KH 2 PO 4, 0.46 g 염화칼슘 2 • 2H 2 O : K10X 재고 솔루션을 준비합니다 250 ML 탈 이온수에 용해. 상…

Representative Results

NO는 중앙 인간 6 및 동물 모델 7 모두에서 혈압 항상성 유지에 관여하지 않습니다. 혈관 평활근의 이완을 제어 할 수있는 능력이 용해 구아닐산 cyclase의 (SGC), cGMP의 8 생성 헴 함유 heterodimeric 효소에 의해 매개된다. 최근에는 혈압 – 수정 유전자 변형 인간 9 혈압 조절에 SGC의 관련성을 보여주는 sGCα 1 sGCβ 1 유전자를 포함하는 현장에서 발견되었다. ?…

Discussion

마우스는 부분 때문에함으로써 인간의 병태 생리에 대한 마우스 모델을 생성하는 유전자 변형을 소개 할 수있는 가능성, 많은 연구자에 대한 선택의 실험적인 모델입니다. 혈관 활성 작은 저항의 상태가 아니라 더 큰 도관 혈관은 주로 혈관 시스템 (11)을 통해 혈액의 흐름의 조절을 정의합니다. 같은 쥐 같은 작은 동물에 저항 동맥의 크기는 미세 혈관 기능을 연구하는 와이어 myograph의 사…

Divulgations

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

저자는 Drs를 인정하고 싶습니다. DMT 압력 myograph 및 박사 부부의 용 폴 황과 드미트리 Atochin. 높은 지방 다이어트 또는 표준 식단에 공급 쥐를 제공 Binglan 유와 종 레이.

자금 출처

이 작품은 하버드 의과 대학 (ES로 매입)에서 의학 학자 과학자 개발 미국 심장 협회 (ES로 매입)에서 부여 10SDG2610313, 그리고 엘레 및 마일 쇼어 50 주년 기념 친목 프로그램에 의해 지원되었다.

Materials

Name Company Cataloge No.
NaCl Fisher Scientific BP358
CaCl2 (2H2O) Fisher Scientific C79-500
KCl Sigma P9333
MgSO4 Fisher Scientific M65-500
KH2PO4 Sigma P3786
NaHCO3 Fisher Scientific BP328
NaOH Fisher Scientific S318
D-Glucose Sigma G8270
EDTA Fisher Scientific BP121
HEPES Sigma H3375
Phenylephrine Acros Organics AC20724
Acetylcholine Sigma A6625
Pressure Myograph System DMT

References

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Citer Cet Article
Shahid, M., Buys, E. S. Assessing Murine Resistance Artery Function Using Pressure Myography. J. Vis. Exp. (76), e50328, doi:10.3791/50328 (2013).

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