Avaliando Murino Resistência Função Usando Miografia Pressão Arterial

Summary

Em Miografia pressão, um pequeno segmento de um vaso intacto é montado sobre duas pequenas cânulas e pressurizado a uma pressão adequada luminal. Aqui, descrevemos o método para medir a resposta vasorelaxation do mouse 3^Rd Ordem artérias mesentéricas em C57 e sGCα<sub> 1</sub^{– / -} Ratos usando Miografia pressão.

Abstract

Sistemas myograph pressão são primorosamente útil na avaliação funcional das pequenas artérias, pressurizado a uma pressão transmural adequado. A condição fisiológica perto alcançado em Miografia pressão permite a caracterização aprofundada das respostas intrínsecas a estímulos farmacológicos e fisiológicos, os quais podem ser extrapolados para o comportamento in vivo do leito vascular. Myograph pressão possui diversas vantagens em relação myographs fios convencionais. Por exemplo, os vasos de resistência menores pode ser estudada a pressões intraluminais estritamente controlados e fisiologicamente relevante. Aqui, vamos estudar a possibilidade de 3 ^ª ordem artéria mesentérica (3-4 mm de comprimento), preconstricted com fenilefrina, a vaso-relaxamento em resposta à acetilcolina. Artérias mesentéricas são montados em duas cânulas ligadas ao sistema pressurizado, selado e que é mantida a uma pressão constante de 60 mmHg. O diâmetro do lúmen e o exterior do vaso são Continuously gravado com uma câmara de vídeo, que permite a quantificação da vasoconstrição e relaxação de vasos em resposta a fenilefrina e acetilcolina em tempo real, respectivamente.

Para demonstrar a aplicabilidade do Miografia pressão para estudar a etiologia da doença cardiovascular, avaliou-se a função vascular endotélio-dependente em um modelo murino de hipertensão sistémica. Camundongos deficientes na subunidade α ₁ da guanilato ciclase solúvel (sGCα ₁ ^{– / -)} são hipertensos quando em um (S6) Fundo 129S6 (sGCα ₁ ^-/-S6), mas não quando em um C57BL / 6 (B6) fundo (sGCα ₁ ^-/-B6). Usando Miografia pressão, demonstramos que sGCα ₁ deficiência resulta em alterações na vasorelaxation endotélio-dependente. A disfunção vascular é mais acentuada em sGCα ₁ ^-/-S6 que em sGCα ₁ ^-/-B6 ratos, provavelmente CONTRIBUTOng a maior pressão no sGCα ₁ ^-/-S6 que em sGCα _um ^-/-B6 ratinhos.

Miografia pressão é uma técnica relativamente simples, mas sensível e mecanisticamente útil que pode ser utilizado para avaliar o efeito de diferentes estímulos na contracção e relaxamento vascular, aumentando, assim, o nosso conhecimento sobre os mecanismos subjacentes à doença cardiovascular.

Introduction

Myograph sistemas de pressão são usadas para medir a função e as propriedades fisiológicas das pequenas artérias, veias e outros recipientes. Um pequeno segmento de uma artéria ou veia intactas é montada sobre dois pequenos cânulas de vidro e pressurizado a uma pressão luminal adequada, permitindo que o recipiente para manter a maior parte do seu características in vivo (Figuras 1 e 2). A condição fisiológica perto num myograph pressão reflecte o comportamento in vivo do leito vascular, o que permite a investigação das propriedades intrínsecas (por exemplo, o tom miogénica) de vasos isolados. Algumas das vantagens da Miografia Miografia pressão ao longo do fio, onde a contração muscular é avaliada através de acoplamento mecânico directo a um transdutor de força ^1, incluem: (i) que as micro artérias de resistência, que definem a resistência global desenvolvido no sistema vascular, podem ser estudadas, enquanto myograph fio está limitado a maiores artérias condutas, (ii) tchapéu o risco de danificar o endotélio é reduzido uma vez que não há necessidade de fios de ser passado através do lúmen do vaso, (iii) que a forma natural do vaso é melhor mantida, e (iv) que dimensão navio pode ser estudado em uma ampla gama de pressões ou estresse de cisalhamento ^2.

Estudar micro vasos pode ser mais informativo do que estudar maiores artérias do conduíte para ajudar a compreender os mecanismos fisiopatológicos e moleculares que contribuem para a alteração do tônus ​​vascular em doenças cardiovasculares, como hipertensão. Por exemplo, a deficiência da função endotelial associada com a alimentação de ratos uma dieta rica em gorduras durante 8 semanas podia ser demonstrado em 2 ^ª ordem artérias mesentéricas ^3, mas não em anéis da aorta (Figura 3). Outra vantagem é que a pressão Miografia constrição miogénica intrínseca do recipiente pressurizado está presente, e que o papel e a função do endotélio para este fenómeno pode ser estudada. Aqui, nós describe o uso de uma pressão myograph para estudar a reactividade vascular mesentérica de rato 3 ^ª ordem artérias resistência numa configuração de óxido nítrico prejudicada (NO)-cGMP sinalização.

Protocol

1. Preparação da Solução Estoque 500X EDTA: pesar 500 mg EDTA-Na 2 • 2H 2 O e dissolver em 50 ml de água deionizada. Guarde à temperatura ambiente. KCl solução despolarizante. Preparar a solução estoque K10X: 3,69 g NaCl, 18,64 g de KCl, 0,36 g MgSO4 anidro, 0,41 g KH 2 PO 4, 0,46 g de CaCl2 • 2H 2 O. Dissolve-se em 250 ml de água desionizada. Guarde à temperatura ambiente. Para 100 ml de …

Representative Results

NO está envolvido centralmente na manutenção da homeostase da pressão sanguínea tanto em humanos como 6 e 7, em modelos animais. A capacidade do NO para controlar o relaxamento do músculo liso vascular é mediada por guanilato ciclase solúvel (sGC), um enzima heterodimérica contendo heme que gera cGMP 8. Recentemente, uma pressão sanguínea de modificação variante genética foi identificada num local que contém a sGCα 1 e genes sGCβ 1, ilustrando a rel…

Discussion

Camundongos são o modelo experimental de escolha para muitos pesquisadores, em parte por causa da possibilidade de introduzir modificações genéticas, gerando modelos de mouse para fisiopatologia humana. O estado vasoativas de pequena resistência, mas não dos vasos maiores conduíte define em grande parte a regulação do fluxo de sangue em todo o sistema vascular ^11. O tamanho das artérias de resistência em animais pequenos, tais como ratos, previne a utilização de um fio myograph para estudar a fun…

Materials

Name	Company	Cataloge No.
NaCl	Fisher Scientific	BP358
CaCl2 (2H2O)	Fisher Scientific	C79-500
KCl	Sigma	P9333
MgSO4	Fisher Scientific	M65-500
KH2PO4	Sigma	P3786
NaHCO3	Fisher Scientific	BP328
NaOH	Fisher Scientific	S318
D-Glucose	Sigma	G8270
EDTA	Fisher Scientific	BP121
HEPES	Sigma	H3375
Phenylephrine	Acros Organics	AC20724
Acetylcholine	Sigma	A6625
Pressure Myograph System	DMT