마이크로 – 온 – 칩 플랫폼은 포토 리소그래피 리플 로우 레지스트 기술, 소프트 리소그래피, 그리고 미세 유체의 조합에 의해 개발되었다. endothelialized 마이크로 플랫폼은 생체 내 미세 혈관에서의 3 차원 (3D) 구조를 모방 제어 지속적인 혈류의 흐름에서 실행하고, 고품질의 실시간 영상을 허용하고 미세 혈관 연구에 적용 할 수 있습니다.
생체 내 동물 연구는 더 많은 시간이 소요되는, 비싼, 그리고 관찰과 정량화가 매우 어려운됩니다 때문에 노력은 미세 혈관의 연구를위한 생체 분석의 개발에 초점을 맞추고있다. 세 가지 차원 (3D) 형상에 대해 생체 내 미세 혈관의 대표 및 지속적인 유체 흐름을 제공 할 때 그러나, 생체 미세 혈관 분석에서 기존의 제한이 있습니다. 포토 리소그래피 리플 로우 레지스트 기술, 소프트 리소그래피, 그리고 미세 유체의 조합을 사용하여, 우리는 멀티 깊이 원형 단면 endothelialized 개발 한 제어 연속 관류에 따라 생체 내 미세 혈관에서의 3D 형상을 모방하고 실행 마이크로 – 온 – 칩 흐름. 긍정적 인 리플 로우 레지스트는 반원형 단면 미세 네트워크와 마스터 몰드를 제조하는 데 사용되었다. REPL 개의 폴리 디메틸 실록산 (PDMS) 마이크로의 정렬 및 본딩마스터 금형 icated, 원통형 마이크로 네트워크를 만들었습니다. 마이크로의 직경은 잘 제어 할 수 있습니다. 또한, 칩 내부에 씨앗을 품고 기본 인간 제대 정맥 내피 세포 (HUVECs)는 세포 4 일 이주 사이의 기간 동안 지속적인 제어 관류에 따라 마이크로의 내부 표면을 지어 것으로 나타났다.
미세 혈관은 혈액 순환 시스템의 일부로서, 혈액과 조직 사이의 상호 작용을 중재 신진 대사 활동을 지원, 조직의 미세 환경을 정의하고, 많은 건강과 병적 상태에 중요한 역할을한다. 체외에서 기능 미세 혈관의 재현부는 복잡한 혈관 현상의 연구 플랫폼을 제공 할 수 있습니다. 그러나, 내피 세포 마이 그 레이션 분석, 내피 관 형성 분석과 쥐 및 쥐 대동맥 링 분석 등의 생체 미세 혈관 분석, 종래의 입체 (3D) 형상과 연속 흐름 제어에 대해 생체 내 미세 혈관의를 다시 할 수 없습니다 1-8. 동물 모델과 같은 각막 신생 혈관 분석, 병아리 융모 막 혈관 분석 및 마트 리젤 플러그 분석 등의 생체 분석,에서를 사용하여 미세 혈관의 연구는 더 많은 시간이 소요되는 비용 높은 관찰과 quantifications에 대해 도전하고 있습니다윤리적 문제 1, 9-13 올립니다.
하지 않았을 등 쉽게 엄격하게 제어 생물학적 조건과 역동적 인 유체 환경과 같은 연구 14, 동물 생체에 관련된 높은 실험 비용과 복잡성을 축소 및 단축하면서 micromanufacturing 및 미세 유체 칩 기술의 발전은 생명 과학에 대한 통찰력의 다양한 활성화 기존의 거시적 기술로 할 수 있었다.
여기, 우리는 endothelialized를 구성하는 방법을 제시 마이크로 – 온 – 칩 생체 내 미세 혈관에서의 3D 형상을 모방하고 포토 리소그래피 리플 로우 레지스트 기술, 소프트 리소그래피, 그리고 미세 유체의 조합을 사용하여 제어 지속적인 혈류의 흐름에서 실행됩니다.
1. 마스터 금형 제작
혈관의 형태 학적위한 설계 원칙 중 하나는 네트워크를 통해 혈관 직경의 분포는 최소의 에너지 고려에 의해 지배되는 진술 머레이의 법칙 16로 알려져 있습니다. 또한 분기점에서 부모 혈관의 직경 큐브 딸 혈관의 직경 큐브의 합에 해당된다는 진술 ( <img alt="식 1" fo:content-width="0.9in" fo:src="/files/ftp_upload/50771/50771eq1.jpg" src="/files/ftp_upload/50771/50771e…
The authors have nothing to disclose.
이 연구는 부분적으로 국립 과학 재단 (NSF 1,227,359)는 각각 국립 과학 재단 (EPS-1003907), 국립 과학 재단 (1007978) 후원 WVU 사전 사무실 및 WVU PSCoR에 의해 자금 WVU EPSCoR 프로그램에 의해 지원되었다. 미세 작업은 WVU 공유 연구 시설 (클린 룸 설비)과 웨스트 버지니아 대학의 칩 연구소 (마이크로 칩 연구소)에 미세 유체 통합 세포 연구로 이루어졌다. 공 촛점 이미징 WVU 현미경 이미징 시설에서 이루어졌다.
Reagent/Material | |||
Reflow Photoresist | AZ Electronic Materials | AZP4620 | |
Developer | AZ Electronic Materials | AZ 400K | |
PDMS | Dow Corning Corporation | Sylgard 184 | |
MCDB 131 Culture Medium | Invitrogen | 10372-019 | |
NacBlue Nuclei Staining | Invitrogen | H1399 | |
PKH Red Stain | Sigma | MINI26 and PKH26GL | |
Fibronectin | Gibco | PHE0023 | |
L-Glutamine | Sigma | G7513 | |
Phosphate Buffered Saline | Invitrogen | 14040-133 | |
HEPES Buffered Saline Solution | Lonza | CC-5024 | |
Trypsin/EDTA | Invitrogen | 25300-062 | |
Trypsin Neutralizing Solution | Lonza | CC-5002 | |
PDMS Curing Agent | Dow Corning Corporation | Sylgard 184 | |
Primary Human Umbilical Vein Endothelial Cells | Lonza | CC-2517 | |
Fetal Bovine Serum | Lonza | 14-501F | |
Diluent C | Sigma | CGLDIL | |
Hoechst33342 | Invitrogen, Molecular Probes | R37605 | |
Dextran | Sigma | 95771 | |
3.5% Paraformaldehyde | Electron Microscopy Science | 15710-S | |
Equipment | |||
Spinner | Laurell Technologies Corporation | WS-400BZ-6NPP/LITE | |
Desiccator | BelArt Products | 999320237 | |
Inverted Microscope | Nikon | Eclipse Ti | |
Syringe Pump System | Harvard Apparatus | PHD Ultra | |
Laminar Biosafety Hood | Thermo Scientific | 1300 Series A2 | |
Planetary Centrifugal Mixer | Thinky | ARE-310 | |
Isotemp Oven | Fisher Scientific | 13-246-516GAQ | |
Optical Microscope | Zeiss | Invertoskop 40C | |
Plasma Cleaner | Harrick Plasma | PDC-32G | |
Hotplate | Barnstead/Thermolyne Cimarec | SP131635 | |
Laser Scanning Confocal Microscope | Zeiss | LSM 510 |