骨髄由来マクロファージの生産
Summary
マクロファージは、長い自然免疫と獲得免疫応答の重要な構成要素として認識されている。マクロファージや微生物間の相互作用の進化遺伝的、および生化学的な側面に関する知識の最近の爆発はマクロファージへの科学的関心をリニューアルしました。この記事では、マウスの骨髄からマクロファージを差別化する方法を説明している。
Abstract
マクロファージは自然免疫と獲得免疫応答の重要なコンポーネントであり、彼らは、それらの強力な殺菌活動の外国の侵略者に対する防御の最前線である。マクロファージは体内に広く分布し、リンパ器官、肝臓、肺、胃腸管、中枢神経系、骨、及び皮膚に存在する。ため、その配分のために、それらは、生理学的及び病理学的プロセスの広い範囲に関与している。マクロファージは、微小環境の変化を認識すると、組織の恒常性を維持することができる汎用性の高い細胞である。数々の病原体は、生き残るためにトロイの木馬としてマクロファージを使用中に複製して、人間と動物の両方に感染し、体全体に伝播させるためのメカニズムを進化させてきた。宿主 – 病原体相互作用の進化遺伝的および生化学的な側面に興味の最近の爆発は、マクロファージに関する科学的関心をリニューアルしました。ここでは、説明します宿主 – 病原体相互作用だけでなく、他のプロセスを研究するためにマクロファージを大量に提供するマウス骨髄からマクロファージを分離し、育成するための手順。
Introduction
マクロファージ機能の重要な側面は、自然免疫と獲得免疫におけるその役割です。そのため不活性粒子、細菌や寄生虫を貪食する能力のため、マクロファージは、外国の侵略に対する防御の第一線である。内在化されると、微生物はファゴリソソーム内で分解される。マクロファージはまた、Tリンパ球などの他の免疫細胞に募集のための信号と抗原を提示を送信します。マクロファージは単球に由来している。単球は、骨髄性幹細胞から骨髄で発生し、それらはマクロファージに分化し、末梢血および種々の組織に移動する。これは、健康な成体マウスは、様々な器官および組織に体全体に分布している約10 8マクロファージ（ 表1）1,2 を含有すると推定される。マクロファージは、それらの微小環境の3,4に適応する能力の優れた表現型および機能的多様性を示す。最も重要なmacropヘイグプロパティは、微生物を貪食し、それらを破壊する能力によって定義され、その殺菌活性、である。食細胞応答は、微生物の接触によって刺激される複雑なシグナル伝達ネットワークの活性化によって定義され、したがって、マクロファージは、多様な刺激に応答して、適宜遺伝子発現を調節する。貪食した後、微生物はゴリソソームと呼ばれる構造で排除されますが、多くの病原性微生物はマクロファージ5の殺菌機能を破壊するための戦略を開発した。異なる微生物種によって利用されるSubversionのメカニズムの多様性は、食作用のプロセス6およびファゴリソソーム生合成の複雑さを証明するものです。感染症は、主要なヒトの健康上の問題であり、数多くのメカニズムや分子は、マクロファージの抗菌活動に参加しています。さらに、微生物によってハイジャックされた殺菌特性のターゲットは不明のままであるため、Eがありますマクロファージに関する科学的関心をリニューアルしました宿主 – 病原体相互作用の進化遺伝的および生化学的な側面への関心のXPLOSION。現在、分野の研究の大部分は貪食能、サイトカイン産生と酸化的バーストの調節に初代マクロファージとは異なり、マクロファージ細胞株、上で行われます。さらに、それらは、顕微鏡検査のためにあまり適していない。インタラクション·マクロファージ·病原体を調べるためには、より多くの生理学的な特徴を示すような骨髄由来マクロファージ（BMDMs）などの主要なマクロファージを、使用することをお勧めします。これらのマクロファージは、トランスジェニックマウスから直接単離する可能性があり、例えば、レンチウイルストランスフェクションなどの新しい技術の利用可能性と、それらの遺伝子発現プロフィールが、遺伝子の過剰発現またはRNA干渉によって変化させることができるので、また、遺伝子改変BMDMs上で動作することができる。ここでは、マウスの骨mを区別するための手順を記載様々な機能のために7日間でマクロファージを多数提供しますマクロファージに矢印は、そのようなプロテオミクス7、トランスクリプトミクス8として分析して、細胞内輸送は9、動的スタディ10、遺伝子スクリーニング（RNAi）とし、薬物スクリーニング11を研究している。
Protocol
Representative Results
Discussion
ここに説明されたプロトコルは、BMDMsを大量に製造する方法を詳しく説明します。 BMDMは、一次細胞であり、未成熟でマクロファージ細胞株とは対照的に、成熟があるので、生物学的機能及び単球から分化したマクロファージの特性を有する。 BMDMsは、遺伝的スクリーニング（RNAi）と、薬物スクリーニング、機能的研究、宿主 – 病原体相互作用研究および調査の他の多くの分野に使用するこ?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、CNRS（PICS EGに2012年から2014年）によって、およびRegioneカンパニア州（のLR N.5、ジョヴァンナモットラに2002年3月28日）からの助成金によってサポートされていました。フィリッポ·コンティは、科学的な協力財団'' Infectiopoleシュッの仲間である。''ニコラBoucheritが研究技術のためのフランスの省の仲間です。資金源は、研究デザイン、データ収集、データ分析、公開することを決定、または原稿の準備に何の役割がありませんでした。
Materials
| Name of Material/Equipment | Company | Catalog Number | Comments/Description |
| DMEM | Gibco Life Technologies | 21969-035 | |
| Fetal Calf Serum | Gibco Life Technologies | 10270 | |
| Penicillin/Streptomycin | Gibco Life Technologies | 15070 | |
| Glutamine | Gibco Life Technologies | 25030-024 | |
| PBS (10x) | Lonza | BEM515F | |
| Red Blood Cell Lysis buffer | Sigma | R7757 | |
| Cell strainer 70 μm Nylon | BD Falcon | 352350 | |
| Cell strainer 40 μm Nylon | BD Falcon | 352340 | |
| 50 ml tubes | any supplier | n/a | |
| 15 ml tubes | any supplier | n/a | |
| Petri dishes (100/20 mm) | any supplier | n/a | culture treated |
| Petri dishes (35/10 mm) | any supplier | n/a |
References
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