Dolaylı immünofloresan (IIF) deneyleri, geleneksel olarak, insan serumunda antinükleer antikorlar (ANA) tespiti için kullanılmıştır. Bu antikorların varlığı, sistemik otoimmün romatizmal hastalıklar (SARD) teşhisinde yardımcı olabilir. Bu protokol etkili doğru bu otoantikor saptamak için IIF tekniği gerçekleştirmek için nasıl gösterir.
ANA testi Romatoloji pozisyon ifadesinin Amerikan Koleji ANA 1 taranması için altın standart yöntem olarak IIF kullanılmasını öngörmektedir. IIF uzman ellerde mükemmel bir tarama testi olmasına rağmen, işleme ve IIF okuma teknik zorluklar slaytlar – gibi emek yoğun slayt işleme, manuel okuma, deneyimli için ihtiyaç, eğitimli teknoloji ve karanlık oda kullanımı gibi – IIF yöntemi yapmak Modern, otomatik laboratuvarlarının iş akışında sığdırmak zor.
Yüksek kaliteli ANA tarama yönelik ilk ve en önemli adımdır dikkatli slayt işliyor. Bu işlem emek yoğundur ve tam sürecin anlaşılması, yanı sıra, bilgi ve deneyim dikkat gerektirir.
Slide okuma karanlık odalarda floresan mikroskobu ile gerçekleştirilir, ve hücre döngüsünün bağlamında, çeşitli desenler aşina eğitimli teknoloji ile yapılırve interfazın ve bölünen hücrelerin morfolojisi. IIF doğru bu tekniği gerçekleştirmek için adımları anlamak, Sard için ilk satırı tarama aracı olduğunu sağladı önemlidir.
Son zamanlarda, dijital görüntüleme sistemleri IIF slaytların otomatik okunması için geliştirilmiştir. Böyle NOVA Görünüm Otomatik Floresan Mikroskop Bu sistemler, rutin IIF iş akışını hızlandırmak için tasarlanmıştır. NOVA Görünüm böylece yorumundan görüntü toplama ayıran, kuyuların yüksek çözünürlüklü dijital görüntü kazanır ve depolar; görüntüler yüksek çözünürlüklü bilgisayar monitörleri yorumlanır bir görülüyor. Bu ileride görüntüleri depolayan ve görüntülerde floresan ışık yoğunluğu verileri sağlayarak operatörün yorumu desteklemektedir. Ayrıca ön olumlu ya da olumsuz olarak sonuçları sınıflandırır ve pozitif örnekler için örüntü tanıma sağlar. Özetle, bu karanlık oda için ihtiyacını ortadan kaldırır, ve otomatikleştirir IIF readi akıcılıkng / yorumlama iş akışı. En önemlisi, okuyucular ve okuma arasındaki tutarlılığını artırır. Ayrıca, barkodlu slaytlar kullanımı ile, transkripsiyon hataları örnek izlenebilirlik ve pozitif hasta kimlik sağlayarak ortadan kalkar. Bu artan hasta veri bütünlüğü ve güvenliği ile sonuçlanır.
Bu videonun genel amacı slayt işleme, ortak IIF desen belirlenmesi ve bu tekniği basitleştirmek ve uyumlaştırmak için yeni gelişmeler getirilmesi de dahil olmak üzere, IIF prosedürü göstermektir.
Terimi, antinükleer antikor (ANA) DNA, proteinler ve Ribonucleoproteins 1, 2 de dahil olmak üzere hücre çekirdeklerinin bileşenleri ile reaksiyona giren antikorların bir türü tarif etmektedir. HEp-2 hücre, antijenler yüzlerce bir yerli protein dizisi, ana 1 tespiti için ideal bir alt-tabaka üretmektedir. Insan serumunda ANA tespiti bağ dokusu hastalıkları için önemli bir tarama aracı ve IIF ANA 1 test için referans yöntemdir. Son zamanlarda, HEp-2 hücreleri üzerinde IIF antijene özgü bağışıklık ve çok katlı yöntemleri ile bazı laboratuarlarda değiştirilmiştir. Nedeniyle yanlış negatif sonuçların kaygıları ve klinisyenler için şeffaflık eksikliği, Amerikan Romatoloji Koleji HEp-2 hücreleri kullanılarak IIF ANA 1 tarama için "altın standart" olması gerektiği sonucuna bir Görev Gücü oluşturdu.
Due ANA taraması öznel doğası gereği, HEp-2 hücrelerinin kalitesi olansonuçlarının doğru ve güvenli raporlama sürmek entegre. Mitotik hücre sayısının yüksek olması, optimal hücre morfolojisi, yeterli confluency ve ilgili antijenlerin ekspresyonu özellikle önemlidir. IIF örüntü tanıma hasta tanısında yardımcı olmak için önemli bir araç olarak hizmet vermektedir. Çeşitli desen önemini anlama klinisyenlerin ve laboratuvar personeli tanıyı doğrulamak için uygun takip test gerçekleştirmenizi sağlar. Örneğin, homojen ANA model, anti-dsDNA antikorlarının veya kromatin varlığında ortaya çıkabilir, ve sistemik lupus eritematoz (SLE) 3 ile ilişkili olabilir. Diğer taraftan, son zamanlarda yaygın, rutin numune kadar% 12 görülür sözde yoğun ince benekli desen (DFS), daha çok anti-DFS70 antikorları ile ilişkili olduğu tarif edilmiştir. Bu antikorlar, (başka bir hastalığa özgü ANA) olmadan ayrı olarak bulunan zaman sistemik otoimmün romatizmal hastalıklar ile ilişkili değildir <> 4-9 sup. Anti-DFS70 antikorları için böylece doğrulayıcı testler, gereksiz refleks testini azaltmak önemli maliyet tasarrufu sunuyor ve hasta anksiyete azaltabilir.
IIF otoantikor saptamak için ilk satırı tarama yöntemi olduğu göz önüne alındığında, bu kullanıcı reaktifler ve doku substratların seçim sonuçlarını nasıl etkilediğini anlaması önemlidir. IIF teknik doğal olarak kişisel olduğu için, kullanılan reaktif maddeler en kaliteli sonuçlar sağlamak önemlidir.
Bu video protokolü bu hedefi IIF yöntemi, ANA ile ilişkili ortak desenleri gerçekleştirmek için gereken doğru adımları ile kullanıcıya tanıtmak, ve laboratuvar iş akışını düzene ve sonuçlarını standardize edebilirsiniz yeni gelişmeleri tanıtmaktır.
Screening by HEp-2 cells is a critical first step in the diagnosis of patients with SARD. However, IIF methods lack harmonization. Sources of variability include preparation of slides, conjugate specificity, and efficiency of the fluorescent microscope and experience of the reader. Despite these concerns, IIF remains the “gold standard” for ANA testing. HEp-2 cells contain a large variety of autoantigens, and provide the ideal substrate for the detection of these autoantibodies. In some laboratories, IIF has been replaced with solid phase screening methods such as multiplex assay or ELISA. The shortcoming of such tests is that they do not display the full range of antigens to be sufficiently sensitive. As a consequence, true positive patients may be missed which can have deleterious consequences In addition to the issues of treatment delay and wrong diagnosis, additional healthcare costs may occur due to the repetition of confirmatory tests or unnecessary diagnostic investigations. Given the inherent challenges to IIF, it is paramount to perform this technique properly to avoid subjectivity in results.
To ensure accurate interpretation and reporting of results for ANA screening, it is vital to use the highest quality substrate. When selecting a HEp-2 substrate, it is critical that the cells be optimized to express clinically relevant epitopes in their native protein state. Transfected or otherwise modified HEp-2 cell lines may not allow proper antibody-antigen binding. In addition, when several different autoantibodies are present simultaneously, recombinant cells may mask one or more patterns. High number of mitotic cells should also be present in the substrate. Adequate number of mitotic cells allows quick and accurate identification of patterns.
In addition to the attributes of the substrate, the objective of this video protocol is to describe the IIF technique by showing critical steps such as the addition of sample, slide washing, addition of conjugate, cover slipping, and determination of positive and negative results. Results can be compromised if proper technique is not used for each of these steps. Proper washing is important to remove all unbound antibody. Some patients display very high amounts of autoantibodies and in these cases it is important to wash the serum from the wells such that it does not contaminate other wells.
Although IIF has traditionally been a very labor intensive and subjective laboratory method, new technologies such as slide processors, barcoded slides and automated digital microscopy can greatly simplify the workflow, increase the consistency and reduce the sources of variability of interpretation.
The authors have nothing to disclose.
Biz onu uzman teknik inceleme için IIF deney ve Carol Büchner gerçekleştirmek için Cassandra Bryant teşekkür ederim.
NOVA Lite HEp-2 IgG (DAPI conjugate) | INOVA Diagnostics | 708102 | |
NOVA View Instrument | INOVA Diagnostics | NV2000 | |
QUANTA Link Workstation | INOVA Diagnostics | LINK010 | |
QUANTA Link Workstation License | INOVA Diagnostics | LINK001 | |
Barcode Scanner | INOVA Diagnostics | LINK019 |