의 분리를위한 최적화 된 농축 기법<em> 박터</em> 박테리오파지 생물 종 토양 샘플에서 격리 된 것
Summary
We present an enrichment protocol for the isolation of bacteriophages infecting bacteria in the Arthrobacter genus. This enrichment protocol produces fast and reproducible results for the isolation and amplification of Arthrobacter phages from soil isolates.
Abstract
Bacteriophage isolation from environmental samples has been performed for decades using principles set forth by pioneers in microbiology. The isolation of phages infecting Arthrobacter hosts has been limited, perhaps due to the low success rate of many previous isolation techniques, resulting in an underrepresented group of Arthrobacter phages available for study. The enrichment technique described here, unlike many others, uses a filtered extract free of contaminating bacteria as the base for indicator bacteria growth, Arthrobactersp. KY3901, specifically. By first removing soil bacteria the target phages are not hindered by competition with native soil bacteria present in initial soil samples. This enrichment method has resulted in dozens of unique phages from several different soil types and even produced different types of phages from the same enriched soil sample isolate. The use of this procedure can be expanded to most nutrient rich aerobic media for the isolation of phages in a vast diversity of interesting host bacteria.
Introduction
토양 환경에서 박터 종의 편재는 호스트 박테리아의이 종으로부터 격리 될 수있는 파지의 광대 한 수와 다양성을 제공합니다. Acintobacteriaceae 가족의 세균 회원 아트라진 및 기타 다양한 살충제와 제초제 1,2,3 등의 난 분해성 화합물을 분해 자신의 이화 작용 경로에 가장 주목할 만하다. 대부분의 연구가 박터의 환경 균주를 사용하여 수행 하였지만,이 속에의 임상 분리는 혈액, 소변, 눈, 모든 계통 발생 학적 이질성 (4)를 표시하는 많은 다른 사람의 소스에서 발견된다.
박터 세균에 대한 연구의 다소 광범위한 몸이 있지만, 단지 소수의 연구는 이러한 다양한 속의 구성원을 감염시킬 파아지에보고한다. 흥미롭게도하지만, 박터에 이전 할 작품은 <토양의 입력으로 몇 가지 주요 별개의 주제에 대한 접촉을 파지EM> 박터 종 활성 오니 처리 설비 (6)에 해로운 거품 감소 및 작업 부위 특이 적 재조합 인테그라 7 유전자를 강조 할 목적으로 5 공업용.
다양한 농축 기술 프로토콜 순수한 파지 박터 종에서 분리 생성하는데 이용되어왔다. 초기 절차는 감염 A. 할 수있는 파지 8 일년 이상주는 상승의 기간 동안 니코틴 염과 같은 추가 독성 제와 토양의 배양을 포함 globiformis. 불안정한 유기물 플라크 분석 기술을 통해 검출 된 파지를 생산하기 위해 등장과 함께 흙을 사용하여 수행 할 연구는 긴 잠복기 (8)을 생략하고, 여과 된. 흥미롭게도하지만, 직접 도금을 닮은 기술은 낮은 성공률과 과거의 연구를 인용, 여전히 연구자 (5)에 의해 현저하게 낮은 성공률을하면서 여러 파지에 이르게 된 과거에 사용되었다 <s> 8입니다.
전반적으로, 과거에 사용 된 분리 기술은 가장 일반적인 호기성 토양을 나타내는 박터 속에도 불구하고 실제로는 약간의 효과를 갖는 떠들썩했었다 자연 4,9에서 분리, 물과 토양에서 파지를 분리하는 반 Twest 및 Kropinski 10 현재 농축 방법 환경 박테리아 균주 만이 우라늄 농축 기술을 풍부하게하는 데 사용 이전 기술에서 적응은 박터 파지를 분리 비효율적 증명했다. 여기에 설명 된 방법의 목적은 이른 농축 방법은 일관되고 효과적으로 박테리아 속에서 파지를 단리와 연관된 이전의 기술적 과제를 극복 박터 파아지를 분리하도록 채택 될 수 있음 "개념 증명"보여주기위한 것이다.
Protocol
Representative Results
Discussion
많은 이전의 시도는 호스트 박터 감염시킬 파아지를 분리에도 불구하고, 우리는 표준 농축 과정을 사용하여 약간의 성공을 거두었 다. 개발 환경 시료로부터 파지를 풍부하게하고 반 Twest Kropinski (10)에 의해 구성된 박테리아의 농축 방법은 일반화 농축 과정의 대부분 기초 남아있다. 이전의 연구에서 증거가 직접 도금의 방법은 분리 (5)의 매우 낮은 성공률에도 불구하고 <em…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 프로토콜의 개발을위한 자금 조달은 고등 교육의 남동부 펜실베니아 컨소시엄 Cabrini 대학 과학 학부에 의해 제공되었다. 추가 자금 지원은 아카디아 대학과 Immaculata 대학에서왔다. 우리는 특히 친절하게 우리의 고립 된 파지의 전자 현미경 이미지 촬영을 위해 세인트 조셉 대학에서 박사 카렌 Snetselaar 감사합니다. 추가 지원은 유전체학과 진화 과학 (SEA-파지) 프로그램을 진행하는 하워드 휴즈 의학 연구소 과학 교육 얼라이언스 파지 사냥꾼에 의해 제공되었다.
Materials
| LB Broth powder | Fisher | BP9722-2 | It's best to order these in bulk. |
| Granulated Agar | Fisher | BP1423-2 | It's best to order these in bulk. |
| 0.22 um syringe filters | Fisher | 09-719A | |
| .22 um buchner filters | Fisher | 430320 | More than 50 mL of liquid can be obtained by carefully swapping the receiving tube. |
| Eppendorf Tubes | Fisher | 05-408-129 | |
| 5 mL pipets individual | Fisher | 13-678-11D | |
| 50 mL conical tubes | Fisher | 76002844 | |
| 15 mL conical tubes | Fisher | 76002845 | |
| 10 mL pipets individual | Fisher | 13-676-10J | |
| 25 mL pipets individual | Fisher | 13-676-10K | |
| Whatman qualitative filter paper | Fisher | 1001-824 |
References
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