Caco-2 cells can serve as an in vitro model to study the enterocyte transport of lipids, and lipid-soluble drugs/vitamins. The permeable membrane system separates the apical from the basolateral compartment, while the lentivirus expression system offers an effective gene overexpression method. The isolation of lipoproteins is confirmed by TEM.
Studies of dietary fat absorption are generally conducted by using an animal model equipped with a lymph cannula. Although this animal model is widely accepted as the in vivo model of dietary fat absorption, the surgical techniques involved are challenging and expensive. Genetic manipulation of the animal model is also costly and time consuming. The alternative in vitro model is arguably more affordable, timesaving, and less challenging. Importantly, the in vitro model allows investigators to examine the enterocytes as an isolated system, reducing the complexity inherent in the whole organism model. This paper describes how human colon carcinoma cells (Caco-2) can serve as an in vitro model to study the enterocyte transport of lipids, and lipid-soluble drugs and vitamins. It explains the proper maintenance of Caco-2 cells and the preparation of their lipid mixture; and it further discusses the valuable option of using the permeable membrane system. Since differentiated Caco-2 cells are polarized, the main advantage of using the permeable membrane system is that it separates the apical from the basolateral compartment. Consequently, the lipid mixture can be added to the apical compartment while the lipoproteins can be collected from the basolateral compartment. In addition, the effectiveness of the lentivirus expression system in upregulating gene expression in Caco-2 cells is discussed. Lastly, this paper describes how to confirm the successful isolation of intestinal lipoproteins by transmission electron microscopy (TEM).
4 – diyet yağ ve lipid içinde çözünür ilaçlar ve vitaminler intestinal çalışmaları lenf fistül MODEL 1 kullanılarak in vivo olarak gerçekleştirilebilir. Ancak, ilgili cerrahi teknikler sadece zor değil, aynı zamanda pahalı değil. In vivo kullanılabilmektedir dışkı analizi dayalı yaklaşımlar da, mide-barsak sisteminde 2,5 yüzdesi alımını belirlemek için temel olarak kullanılmaktadır. Bu yazıda anlatılan in vitro model daha düşük maliyetli olduğunu ve ilgili teknikler tartışmalı az zorlayıcı bulunmaktadır. Genetik modifikasyonlar çalışmaları da zaman alıcı, bu in vitro bir model kullanılarak gerçekleştirilmiştir zaman daha ekonomik ve daha az bulunmaktadır.
Enterositler tarafından alınır lipit çözünür malzeme lipoproteinler 6,7 içine paketlenmiş olduğundan, lipoproteinlerin üretmek için bu in vitro modelin etkinliği çok önemlidir. iki ana intestinal lipoproteinler kilomikronlar, çok düşük yoğunluklu lipoproteinler (VLDL) vardır. Lipidler mide-bağırsak lümeninde bol mevcut olduğunda çapı 80 nm ya da daha fazlası ile lipoproteinler olarak tanımlanan kilomikronlar, küçük bağırsak tarafından sıkı bir şekilde üretilir. Onlar büyük lipoproteinler olduğundan, şilomikronlar makul en verimli lipit taşıyıcıları vardır. Şilomikron 8 üretebilen bu in vitro modeli, diyet yağ emme, gut lipid çözünür vitamini emme ve oral lipofilik ilaç biyo-incelemek için kullanılabilir. lipoprotein fraksiyonuna lipid çözünür moleküller, vitaminler ya da ilaçların bulunması, ince bağırsakta kendi emilme bir göstergesidir. Daha önce ele alındığı gibi, bu model, oral lipofilik ilaç biyo-6 geliştirmek için de kullanılabilir.
Bu kağıt Caco-2 hücreleri geçirgen zar veya normal doku kültürü yemekleri, nasıl lipit mi muhafaza edilmelidir açıklanırLipoprotein üretimini stimüle etmek için soğutun lentivirüs sentezleme sisteminin etkin aşırı ekspresyonunu gerçekleştirmek için kullanılabilir nasıl hazırlanmalı ve izole lipoproteinler kadar analiz edilmelidir.
Bu yazıda, kullanılabilecek iki sistem Caco-2 hücreleri, yani düzenli doku kültürü çanak ve geçirgen zar açıklanmıştır korumak için. geçirgen zar sistemi kullanmanın faydaları apikal ayrılmasını ve bazolateral bölmeleri ve lipid karışımı inkübe ve aynı zamanda lipoprotein salgılanmasını toplamak için yeteneği vardır. Ancak, geçirgen zar ekler pahalıdır, ve polikarbonat membran iyi bir hücre görünürlüğü izin vermez. Bu in vitro modelin avantajlarından biri genetik man…
The authors have nothing to disclose.
This work was supported by the Seed Grant Award from California Northstate University College of Pharmacy (to AMN). The authors would like to thank California Northstate University College of Pharmacy for covering the publication cost of this article, and George Talbott for his help in editing this manuscript.
DMEM | VWR | 16750-112 | Pre-warm the growth media in individual tissue culture dish before adding cells |
FBS | Fisher | 3600511 | We do not heat inactivate our serum |
Trypsin | VWR | 45000-660 | Cells can be washed with PBS prior to trypsin treatment |
Permeable membrane system | Fisher | 7200173 | 10-cm dish, 3-mm pore size, polycarbonate membrane |
10 cm dish | Fisher | 08-772-E | Tissue culture dish |
15 cm dish | Fisher | 08-772-24 | Tissue culture dish |
24 well plate | Fisher | 12565163 | Tissue culture plate |
Lipid-based transfection reagent | Fisher | PRE2691 | Can be substituted with other transfection reagent |
Reduced serum media | Invitrogen | 11058021 | For transfection |
pLL3.7 eGFP | Addgene | 11795 | https://www.addgene.org/11795/ |
Bottle-top filter | Fisher | 9761120 | 0.45 mm pore |
Polybrene | Fisher | NC9840454 | 10 mg/mL |
Oleic acid | Sigma | 01383-5G | Prevent freeze-thaw cycle |
Lecithin | Fisher | IC10214625 | Egg lecithin |
Sodium taurocholate | Fisher | NC9620276 | Product discontinued; alternative catalog number: 50-121-7956 |
Protease inhibitor cocktail tablet (EDTA-free) | Fisher | 5892791001 | Used mainly for samples that need TEM analysis |
Polycarbonate ultracentrifuge tube | Fisher | NC9696153 | Reusing it multiple times will collapse the tube |
Lid for ultracentrifuge tube | Fisher | NC9796914 | A tool is required to remove the tube/lid from rotor |
Syringe | Fisher | 50-949-261 | Disposable |
Syringe filter | Fisher | 09-719C | Pore size = 0.2 mm; nylon |
Phosphotungstic acid | Fisher | AC208310250 | For preparing 2% phosphotungstic acid, pH 6.0 |
Tweezer | Fisher | 50-238-62 | Extra fine and strong tips |
Formvar/carbon grid | Fisher | 50-260-34 | Formvar/carbon film square grid 400 Copper |