Впечатление цитологии Лид Wiper Площадь
Summary
We collected, stained and imaged cells from the conjunctiva of the inner eyelid margin of human subjects. By characterizing cell morphology and metabolic activity, this method may further our understanding of dry eye and the role that friction between the ocular surfaces may play in perceiving ocular discomfort.
Abstract
Few reports on the cellular anatomy of the lid wiper (LW) area of the inner eyelid exist and only one report makes use of cytological methods. The optimization of a method of collecting, staining and imaging cells from the LW region using impression cytology (IC) is described in this study. Cells are collected from the inner surface of the upper eyelid of human subjects using hydrophilic polytetrafluoroethylene (PTFE) membranes, and stained with cytological dyes to reveal the presence of goblet cells, mucins, cell nuclei and various degrees of pre- and para-keratinization. Immunocytochemical dyes show cell esterase activity and compromised cell membranes by the use of a confocal scanning laser microscope. Up to 100 microscopic digital images are captured for each sample and stitched into a high-resolution, large scale image of the entire IC span. We demonstrate a higher sensitivity of IC than reported before, appropriate for identifying cellular morphologies and metabolic activity in the LW area. To our knowledge, this is the first time this selection of fluorescent dyes was used to image LW IC membranes. This protocol will be effective in future studies to reveal undocumented details of the LW area, such as assessing cellular particularities of contact lens wearers or patients with dry eye or lid wiper epitheliopathy.
Introduction
Верхнее веко человек выполняет около 10000 мигает каждый день 1, с помощью всего 1 – 2 мм узкая область конъюнктивы глазного противостояния миру. Из – за его движения протирки во время миганий, а эта часть края крышки было названо "крышка стеклоочистителя" область 2. Предполагается, что трение увеличивается в этом регионе во время привычного миганием, благодаря крышке очищающего по всему земному шару. Это может играть существенную роль в глазном комфорте. Кто носит контактные линзы , в частности , опыт глазного дискомфорта , и это является одной из главных причин прекращения ношения линз 3. Когда контактная линза находится на глазу, коэффициент трения между материалом линзы и поверхностью глазного яблока было показано , что изменение 4. Существует доказательство того, чтобы предположить , что симптомы сухости может быть связано с этим измененном трения 2,5,6.
Эта ассоциация также может быть отражено в клинически наблюдаемых явлений, в частности, крышка Wiза эпителиопатии (LWE), также называемая верхняя крышка Маржа окрашивания (ULMS) 6. LWE является ранним признаком раздражения глаз и потенциальным прогностическим для сухой глазной болезни. Наблюдается и измеряется витального окрашивания верхнего и нижнего края областей крышки. Хотя эта система классификации 2 и его клиническая обоснованность (т.е., корреляция с субъективными симптомами) , все еще в стадии обсуждения, глазного дискомфорта остается загадкой для врачей и ученых , так и, что самое главное, неудобство для пациентов.
На сегодняшний день, мало известно о клинически релевантных вариантов в (суб-) клеточной анатомии и физиологии стеклоочистителя области крышки 7 и только один отчет использует цитологических методов 8. Впечатление цитологии (IC) был принят на работу в течение более 40 лет , чтобы собрать клетки из эпителиальной поверхности бульбарных или предплюсны конъюнктивы путем применения мембраны 9,10. После удаления прилипшие клетки претерпевают Cytological окрашивание и микроскопические изображения. Из-за анатомических и клеточных различий в обтирочного области крышки, этот метод требует оптимизации.
Protocol
Representative Results
Discussion
Впечатление цитологическое, как правило, выполняется на бульбарной конъюнктивы, с использованием смешанного сложного эфира целлюлозы мембраны. Образцы разрезают по размеру из массивного материала листов, стерилизованы, применяется и удаляется из конъюнктивальной поверхности с помо…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
We would like to acknowledge our colleague Dr. Jalaiah Varikooty who provided insight and expertise on the topic of the lid wiper, that greatly assisted this research.
Materials
| Alcian Blue, 1% in 3% Acetic Acid | Sigma | B8438-250ML | |
| Hematoxylin, Gill 1 | Sigma | GHS116-500ML | |
| Papanicolaou stain, OG-6 | Sigma | HT40116-500 ml | |
| Papanicolaou stain, Modified EA | Sigma | HT40232-1L | |
| Live/Dead Viability/Cytotoxicity Kit | Life Technologies | L-3224 | contains ethidium homodimer-1 and Calcein AM dyes |
| Alcaine (0.5% proparacaine hydrochloride) | Alcon | ||
| Millicell Cell Culture Insert, 12 mm, hydrophilic PTFE, 0.4 µm | EMD Millipore | PICM01250 | |
| 35 mm Glass Bottom Dishes | MatTek Corporation | P35G-0-20-C |
References
- Barbato, G., et al. Diurnal variation in spontaneous eye-blink rate. Psychiatry Res. 93, 145-151 (2000).
- Korb, D. R., et al. Lid-Wiper Epitheliopathy and Dry-Eye Symptoms in Contact Lens Wearers. Eye & Contact Lens. 28, 211-216 (2002).
- Dumbleton, K., Woods, C. A., Jones, L. W., Fonn, D. The impact of contemporary contact lenses on contact lens discontinuation. Eye & Contact Lens. 39, 93-99 (2013).
- Roba, M., Duncan, E., Hill, G., Spencer, N., Tosatti, S. Friction measurements on contact lenses in their operating environment. Tribol Lett. 44, 387-397 (2011).
- Sickenberger, W., Pult, H., Sickenberger, B. LIPCOF and contact lens wearers: a new tool to forecast subjective dryness and degree of comfort of contact lens wearers. Contactologia. 22, 74-79 (2000).
- Pult, H., Purslow, C., Berry, M., Murphy, P. J. Clinical tests for successful contact lens wear: relationship and predictive potential. Optom Vis Sci. 85, E924-E929 (2008).
- Doughty, M. J. Morphological features of cells along Marx’s line of the marginal conjunctiva of the human eyelid. Clin Exp Optom. 96, 76-84 (2013).
- Jalbert, I., et al. Assessing the human lid margin epithelium using impression cytology. Acta Ophthalm. 90, e547-e552 (2012).
- Nelson, J. D. Impression cytology. Cornea. 7, 71-81 (1988).
- Egbert, P. R., Lauber, S., Maurice, D. M. A simple conjunctival biopsy. Am J Ophthalmol. 84, 798-801 (1977).
- Wilson, T. . Confocal microscopy. , 1-64 (1990).
- Denk, W., Strickler, J. H., Webb, W. W. Two-photon laser scanning fluorescence microscopy. Science. 248, 73-76 (1990).
- Tomlins, P., Roy, P., Curnow, J., Rauz, S. Assessment of the EyePRIM Device for Conjunctival Impression for Flow Cytometry. Invest Ophthalm Vis Sci. 54, 5430-5430 (2013).
- Knop, E., Korb, D. R., Blackie, C. A., Knop, N. The lid margin is an underestimated structure for preservation of ocular surface health and development of dry eye disease. Res Proj Dry Eye Syn. 45, 108-122 (2010).
- Knop, E., et al. The lid wiper and muco-cutaneous junction anatomy of the human eyelid margins: an in vivo confocal and histological study. J Anat. 218, 449-461 (2011).
- Christensen, J. A., Skaarland, E. Nuclear and cell area measurements in the cytological evaluation of pleural effusions: a study of subjective assessments and morphometric measurements. Diag Cytopathol. 3, 50-54 (1987).
