Summary
हम एक, तेजी से आणविक-आधारित इन्फ्लुएंजा ए और बी परख का वर्णन है। इन्फ्लुएंजा परख इन्फ्लूएंजा विशिष्ट प्राइमरों आणविक बीकन जांच के साथ लक्ष्य का पता लगाने के द्वारा पीछा के साथ इज़ोटेर्माल प्रवर्धन को रोजगार से 15 मिनट के भीतर प्रत्येक लक्ष्य का पता लगाता है। इन्फ्लुएंजा ए और बी परख उपयोगकर्ता के अनुकूल है और प्रदर्शन करने के लिए कम से कम हाथों पर समय की आवश्यकता है।
Abstract
इन्फ्लुएंजा एक संक्रामक श्वसन मनुष्यों में से इन्फ्लूएंजा वायरस ए और बी की वजह से बीमारी है और रुग्णता और मृत्यु दर हर साल की एक महत्वपूर्ण राशि का कारण बनता है। इन्फ्लुएंजा ए और बी परख पहले CLIA-माफ कर दी आणविक तेजी फ्लू परीक्षण उपलब्ध था। इन्फ्लुएंजा ए और बी परीक्षण इन्फ्लूएंजा विशिष्ट प्राइमरों आणविक बीकन जांच के साथ लक्ष्य का पता लगाने के द्वारा पीछा के साथ इज़ोटेर्माल प्रवर्धन को रोजगार से काम करता है। इधर, जमी पर इन्फ्लुएंजा ए के प्रदर्शन और बी परख, nasopharyngeal झाड़ू (एनपीएस) नमूनों वायरल परिवहन मध्यम (वीटीएम) में संग्रहीत एक सांस पैनल परख की तुलना में थे संग्रहीत।
इन्फ्लुएंजा ए और बी परख के प्रदर्शन श्वसन पैनल संदर्भ विधि के परिणामों की तुलना द्वारा मूल्यांकन किया गया था। कुल इन्फ्लूएंजा वायरस ए के लिए संवेदनशीलता 67.5% (95% सीआई (सीआई), 56.6-78.5) था और विशिष्टता 86.9% (सीआई, 71.0-100) था। इन्फ्लूएंजा वायरस बी परीक्षण के लिए, संवेदनशीलता और विशिष्टता 90.2% थे (सीआई, 68.5-100) और 98.8% (सीआई, 68.5-100), क्रमशः।
यह प्रणाली एक पूरी तरह से एकीकृत, बंद, छोटे पदचिह्न सिस्टम पर चलता है किसी अन्य वर्तमान में उपलब्ध आणविक परख और सरल, पिपेट से मुक्त प्रक्रिया की तुलना में काफी कम समय परीक्षण का लाभ दिया है। कुल मिलाकर, इन्फ्लुएंजा ए और बी परख इस अध्ययन में मूल्यांकन एक बिंदु का ख्याल तेजी से इन्फ्लूएंजा नैदानिक परीक्षण के रूप में काम करने की क्षमता है।
Introduction
इन्फ्लुएंजा वायरस के संक्रमण रुग्णता और मृत्यु दर को हर साल 1, 2, 3 की एक महत्वपूर्ण राशि में परिणाम। सीधी इन्फ्लूएंजा जैसे बुखार, मांसलता में पीड़ा, सिर दर्द, और गैर उत्पादक खांसी 4, 5 के रूप में संवैधानिक और श्वसन लक्षण की विशेषता है। बड़े व्यक्तियों, छोटे बच्चों, immunocompromised रोगियों, और रोगियों अंतर्निहित comorbidities के साथ इस तरह निमोनिया, मायोकार्डिटिस, केंद्रीय तंत्रिका तंत्र के रोग, या मौत 6, 7 के रूप में गंभीर जटिलताओं के लिए एक उच्च जोखिम में हैं।
इन्फ्लूएंजा संक्रमण लक्षण शुरू होने के 48 घंटे के भीतर एंटीवायरल थेरेपी की है कि शीघ्र प्रशासन रोग की गंभीरता और लंबाई 8 को कम कर सकते में अन्य श्वसन वायरस से अद्वितीय है। इन्फ्लूएंजा की तेजी से पहचान भी कर दिया गया हैअनावश्यक एंटीबायोटिक दवाओं 9, 10 के उपयोग को कम करने के लिए दिखाया गया है। इसके अलावा, इन्फ्लूएंजा संक्रमण के साथ अस्पताल में भर्ती मरीजों को उचित संक्रमण नियंत्रण सावधानियों के साथ अलग कमरे में रखा जाना चाहिए। हालांकि, गैर इन्फ्लूएंजा वायरस के कारण सांस की बीमारियों चिकित्सकीय इन्फ्लूएंजा से भेद करना मुश्किल हो सकता है। इस कारण से, तेजी से और सही इन्फ्लूएंजा के लिए नैदानिक परीक्षण नैदानिक रोगी प्रबंधन के लिए बहुत महत्वपूर्ण है।
कई assays का पता लगाने और इन्फ्लूएंजा वायरस की पहचान के लिए उपलब्ध हैं। रैपिड इन्फ्लूएंजा प्रतिजन का पता लगाने के परीक्षण (RIDTs) व्यापक रूप से बिंदु का ख्याल परीक्षण के रूप में नैदानिक अभ्यास में इस्तेमाल किया क्योंकि वे का उपयोग और 15 30 मिनट 11, 12 के लिए भीतर परिणाम प्रदान करने के लिए सरल कर रहे हैं कर रहे हैं; हालांकि, उनकी संवेदनशीलता को व्यापक रूप से (10-80%) निर्माता और जनसंख्या के आधार पर परीक्षण किया जा रहा है, और भिन्न इन्फ्लूएंजा प्रकार और subtyपीई 13, 14, 15। प्रत्यक्ष प्रतिदीप्ति assays (DFAs) RIDTs पर बेहतर संवेदनशीलता प्रदान करते हैं लेकिन प्रसंस्करण समय अधिक से अधिक (~ 3 घंटा) है और कुशल प्रौद्योगिकीविदों 16, 17 तक पूरा किया जाना चाहिए। वायरल संस्कृति इन्फ्लूएंजा निदान के लिए स्वर्ण मानक किया गया है और दोनों RIDTs और DFAs 18 से अधिक संवेदनशीलता में सुधार हुआ है। हालांकि, इन्फ्लूएंजा वायरल संस्कृति को पूरा करने के लिए, रोगी प्रबंधन 19 सहायता में इसकी उपयोगिता ह्रासमान से 2-14 डी कहीं भी ले जा सकते हैं। अन्त में, न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन परीक्षण (Naat) इन्फ्लूएंजा निदान में नए सोने के मानक के रूप में संस्कृति तकनीक जगह ले ली है। Naat कुछ ही घंटों में इन्फ्लूएंजा का पता लगाने के लिए सबसे बड़ी संवेदनशीलता है माना जाता है। हालांकि, Naat सबसे महंगी assays हैं और 5 प्रदर्शन करने के लिए विशेष उपकरणों की आवश्यकता होती है और प्रौद्योगिकीविदों 20, 21, 22, 23, 24, 25।
इन्फ्लूएंजा ए और बी यहाँ वर्णित परख पहले CLIA-माफ कर दी आणविक तेजी फ्लू परीक्षण है कि आसानी से उपलब्ध है। इस परख एक Nicking endonuclease प्रवर्धन प्रतिक्रिया (पास) इन्फ्लूएंजा विशिष्ट प्राइमरों आणविक बीकन जांच के साथ लक्ष्य का पता लगाने के द्वारा पीछा के साथ इज़ोटेर्माल प्रवर्धन का उपयोग करता है को रोजगार से काम करता है। इस परख, बी से इन्फ्लूएंजा एक differentiates की स्थापना की और एक नमूना प्रक्रिया करने के लिए 2 मिनट की आवश्यकता है, और पूरा करने के लिए 15 मिनट की कुल आवश्यकता है।
यहाँ, हम इन्फ्लुएंजा ए और बी परख के लिए प्रोटोकॉल उपस्थित थे। इसके अलावा, हम एक नमूना डेटा संग्रहीत nasopharyngeal झाड़ू (एनपीएस) पर इन्फ्लुएंजा ए के प्रदर्शन और बी परख की तुलना में वायरल परिवहन माध्यम में संग्रहित नमूनों सेट (वीटी प्रदानएम) एक और श्वसन रोगज़नक़ पैनल परख करने के लिए।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
नैतिकता वक्तव्य: का प्रयोग करें बाएँ से अधिक नैदानिक नमूनों को मंजूरी दे दी और मेमोरियल स्लोन केटरिंग कैंसर सेंटर संस्थागत समीक्षा बोर्ड के दिशा निर्देशों के बाद किया जाता है।
1. परख रनिंग पहले
नोट: इन्फ्लुएंजा ए और बी परख nasopharyngeal झाड़ू नमूनों के लिए और वायरल परिवहन मीडिया में संग्रहीत nasopharyngeal swabs के लिए मंजूरी दे दी है। Swabs किट में शामिल किए गए हैं और अनुकूलतम प्रदर्शन के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए। हालांकि, रेयान, फोम, आते रहे swabs या पॉलिएस्टर नाक के फाहे भी नाक झाड़ू नमूने एकत्र करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
- एक नाक झाड़ू नमूना इकट्ठा करने के लिए, नथुने सबसे अधिक दिखाई जल निकासी है या कि सबसे भीड़भाड़ है कि में झाड़ू डालें। कोमल रोटेशन के साथ, नथुने में झाड़ू धक्का जब तक प्रतिरोध से मुलाकात की है और धीरे धीरे नथुने से हटाने से पहले नाक की दीवार के खिलाफ कई बार बारी बारी से। swabs की दुकान और उन्हें वायरल परिवहन मीडिया (वीटीएम) के 3 मिलीग्राम से युक्त शीशियों में परिवहन।
नोट: सावधान ध्यान appropr के लिएदेर हो गई नमूना संग्रह गलत परिणाम निकल सकता है अपर्याप्त नमूना संग्रह के रूप में लिया जाना चाहिए।
नोट: स्वाब नमूनों के संग्रह के बाद जितनी जल्दी हो सके परीक्षण किया जाना चाहिए। हालांकि, वे अप करने के लिए 2 घंटे के लिए कमरे के तापमान पर संग्रहीत या अप करने के लिए 24 घंटे के लिए 2-8 डिग्री सेल्सियस पर प्रशीतित यदि परीक्षण के तुरंत उपलब्ध नहीं है हो सकता है। हौसले से एकत्र नमूनों इष्टतम परीक्षण के प्रदर्शन के लिए आदर्श होते हैं। अनुचित नमूना हैंडलिंग, भंडारण, और / या परिवहन गलत परिणाम निकल सकता है।
ध्यान दें: एक एहतियाती उपाय के रूप में, इस परीक्षण प्रदर्शन व्यक्तियों के रूप में संभावित सार्वभौमिक सावधानियों का पालन जब नमूनों से निपटने के द्वारा संक्रामक सभी नमूनों व्यवहार करना चाहिए। - परीक्षण से पहले कमरे के तापमान को सभी नमूनों को ले आओ।
नोट: सभी परीक्षण घटकों केवल एक ही उपयोग के लिए कर रहे हैं और कई परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल नहीं किया जाना चाहिए। अलग-अलग नंबरों से बहुत किट घटकों मिश्रण नहीं है। अतीत में उनके समाप्ति की तारीख किट अभिकर्मकों का प्रयोग न करें। - Roo के लिए नीले नमूना रिसीवर लाओएम तापमान परीक्षण करने से पहले। संतरे का परीक्षण आधार कमरे के तापमान को गर्म करने के लिए आवश्यकता के बिना परीक्षण किया जा सकता है।
- जब तक तुरंत उपयोग करने से पहले पन्नी लपेटकर में सभी परीक्षण टुकड़े छोड़ दें। साधन के पक्ष में पावर बटन दबाकर साधन चालू करें। यूजर आईडी और प्रेस दर्ज करें 'ठीक है।'
2. टेस्ट रनिंग
- परीक्षा की प्रक्रिया शुरू करने के लिए, साधन स्क्रीन पर 'भागो टेस्ट' स्पर्श करें। ऑन-स्क्रीन कीबोर्ड या बारकोड स्कैनर और प्रेस का उपयोग करके रोगी आईडी दर्ज 'ठीक है।' ढक्कन खोलें और ऑरेंज परीक्षण आधार धारक में ऑरेंज परीक्षण आधार डालें।
- पुष्टि करें कि सही परीक्षण स्क्रीन और प्रेस पर प्रदर्शित होता है 'ठीक है।' नीले नमूना रिसीवर धारक में नीले नमूना रिसीवर डालें।
ध्यान दें: साधन में रखने के रूप में यह सही संचालन के तापमान तक पहुँचने से क्षालन बफर रोकने जाएगा और परीक्षण के प्रदर्शन को प्रभावित कर सकता से पहले नमूना रिसीवर मत खोलना। नमूना रिसीवर को गर्म करने के लिए प्रतीक्षा करें। साधन से प्रेरित है, पन्नी सील हटाने और रोगी झाड़ू जगह नमूना रिसीवर में परीक्षण किया जाना है। - सख्ती 10 सेकंड के लिए तरल में झाड़ू मिश्रण, पक्ष के खिलाफ झाड़ू सिर दबाने नमूना रिसीवर के रूप में आप यह मिश्रण झाड़ू से नमूना हटाना मदद करने के लिए। 'ठीक' दबाएं आगे बढ़ने के लिए। वायरल परिवहन माध्यम में संग्रहित का परीक्षण swabs, 10 सेकंड के लिए वीटीएम भंवर तो नमूना रिसीवर के लिए 200 μl जोड़ें।
- नीले नमूना रिसीवर में सफेद हस्तांतरण कारतूस दबाएँ। नमूना रिसीवर पर दबाव बढ़ जाता है जब तक नारंगी सूचक जारी रखें।
- लिफ्ट और फिर परीक्षण आधार करने के लिए स्थानांतरण कारतूस कनेक्ट। संतरे का सूचक का निरीक्षण एक बार कारतूस हस्तांतरण सही ढंग से जुड़ा हुआ है उतर। ढक्कन बंद करें और जब तक "परीक्षण पूरा" खुला नहीं हैसंदेश स्क्रीन पर प्रकट होता है।
नोट: जब पन्नी को हटाने, यह सुनिश्चित करने के लिए कि यह जगह में रहता नमूना रिसीवर के किनारे पर दो उंगलियों जगह है।
3. गुणवत्ता नियंत्रण
- होम स्क्रीन पर 'भागो क्यूसी टेस्ट' स्पर्श करें। चलाने के लिए चयन QC परीक्षण। परीक्षण प्रकार 'ठीक है' छू और निम्न स्क्रीन पर परीक्षण पूरा करने के लिए संकेत द्वारा क्यूसी नमूना परीक्षण के लिए इरादा मैच के लिए की पुष्टि करें।
4. परिणाम व्याख्या
- टेस्ट रन पूरा हो गया है के बाद, परीक्षण इन्फ्लुएंजा ए, बी, अज्ञात उपप्रकार की उपस्थिति के लिए व्याख्याओं के साथ स्क्रीन पर प्रदर्शित के परिणामों का पालन। अवैध परिणामों के लिए परीक्षण दोहराना।
5. रखरखाव और सफाई
- साधन और आसपास के बेंच 70% इथेनॉल या 10% ब्लीच समाधान के साथ दैनिक क्षेत्र को साफ। एक नम, एक प्रकार का वृक्ष मुक्त कपड़ा साफ करने पर सफाई समाधान स्प्रे। समाधान साधन पर सीधे नहीं डालना चाहती।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
इस अध्ययन में, संग्रहीत एनपीएस नमूनों 15 दिसंबर, 2012 और 1 मार्च के बीच एक इन्फ्लूएंजा के प्रकोप के दौरान मेमोरियल स्लोन-केटरिंग कैंसर सेंटर (MSKCC) में इन्फ्लूएंजा जैसे लक्षणों के साथ पेश inpatients 2013 एनपीएस नमूनों 3 मिलीलीटर में प्रस्तुत किया गया से एकत्र किए गए थे वीटीएम की और एक आणविक परख है कि श्वसन वायरस (आरपी), इन्फ्लुएंजा ए, ए -1, ए 3, और बी सहित के एक पैनल का पता लगाता अध्ययन अवधि के दौरान के साथ नियमित नैदानिक अभ्यास के हिस्से के रूप में परीक्षण किया है, 3,675 एनपीएस नमूनों प्रस्तुत किया गया परीक्षण के लिए MSKCC नैदानिक प्रयोगशाला के लिए। उन नमूनों, 45, 425, 37, और 77 के इन्फ्लूएंजा के लिए पॉजिटिव पाए वायरस एक-1, ए 3, ए-उन-subtypable (एयू), और बी क्रमश: आरपी के साथ। 360 सकारात्मक नमूनों, इन्फ्लूएंजा उपप्रकारों में से प्रत्येक से 40 नमूने, और 37 Au के कुल। इसके अलावा, 1-2 नकारात्मक नमूने है कि तुरंत पहले या सकारात्मक नमूनों में से प्रत्येक के बाद प्रयोगशाला के लिए पहुंचे बाद में testi के लिए चुने गएइन्फ्लूएंजा ए और बी परख के साथ एनजी।
कुल में, इन्फ्लूएंजा ए और बी परख का पता चला 79 इन्फ्लूएंजा वायरस ए, 37 इन्फ्लूएंजा वायरस बी, 240 नकारात्मक, और 4 अवैध परिणाम (आंतरिक नियंत्रण की विफलता) (1 टेबल)। वहाँ केवल आरपी और दो इन्फ्लुएंजा एक पर सकारात्मक और केवल बी परख पर सकारात्मक 44 नमूनों के साथ 46 प्रतिकूल परिणाम है। एक तीसरा आणविक आधारित इन्फ्लूएंजा परख 44 बेताल नमूनों जो पता लगाया 33/43 पर प्रदर्शन किया गया था (8 इन्फ्लूएंजा वायरस ए, 21 Au, और 2 इन्फ्लूएंजा वायरस बी) कि आरपी द्वारा सकारात्मक थे और 0/1 सकारात्मक (इन्फ्लूएंजा वायरस ए) इन्फ्लुएंजा ए और बी परख द्वारा। दो या दो से अधिक assays के बीच एक समझौते पर एक सटीक पहचान माना जाता था।
कुल इन्फ्लूएंजा वायरस एक के लिए समग्र इन्फ्लुएंजा ए और बी परख संवेदनशीलता 67.5% (95% सीआई (सीआई), 56.6-78.5) था। इन्फ्लूएंजा एक उपप्रकार के लिए संवेदनशीलता A-1, 84.6% (सीआई, 58.5-100), A- था 3, 90.2% (सीआई, 62.8-100), और Au, 21.9% (सीआई, 19.6-24.1)। इन्फ्लूएंजा वायरस एक के लिए समग्र विशिष्टता 86.9% (सीआई, 71.0-100) था। इन्फ्लूएंजा वायरस बी परीक्षण के लिए, संवेदनशीलता और विशिष्टता 90.2% (सीआई, 68.5-100) और 98.8% (सीआई, 68.5-100), क्रमशः थे।
(चित्रा 1), कुल मिलाकर, बेताल परिणामों के साथ नमूनों में मतलब सीटी मूल्यों सहमत परिणाम (p> 0.000 16.4 ± 0.48 बनाम 25.7 ± 0.51) के लिए प्राप्त उन लोगों की तुलना में काफी अधिक थे।
चित्रा 1: औसत सीटी नमूने है कि सकारात्मक और नकारात्मक रहे थे, क्रमशः प्रत्येक इन्फ्लूएंजा उपप्रकार के लिए परख के लिए आरपी परख द्वारा निर्धारित मूल्यों। त्रुटि सलाखों के मानक विचलन का प्रतिनिधित्व करते। **, पी <0.01; ***, पी <0.001।1large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
तालिका 1: इन्फ्लुएंजा ए और बी वीटीएम पर प्रदर्शन संदर्भ परिणामों की तुलना में नमूनों।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
इन्फ्लुएंजा वायरस रुग्णता और मृत्यु दर के महत्वपूर्ण दुनिया भर में व्यापक कारण होते हैं। इन्फ्लूएंजा के तेजी से और सही निदान श्वसन के मौसम के दौरान फ्लू फैलने के प्रबंध के लिए प्रमुख कुंजी से एक है। अन्य प्रतिजन आधारित परीक्षण तेजी से और प्रदर्शन करने के लिए आसान कर रहे हैं; हालांकि, वे कम संवेदनशीलता 13 लोगों की है। दूसरी ओर, पारंपरिक आणविक परीक्षण संवेदनशीलता में सुधार हुआ है, लेकिन प्रदर्शन और अधिक महंगी हैं करने के लिए और अधिक अनुभवी प्रयोगशाला प्रौद्योगिकीविदों की आवश्यकता होती है। इन्फ्लुएंजा ए और बी इस अध्ययन और प्रोटोकॉल में वर्णित परख एक CLIA-माफ कर दी, तेजी से आणविक इन्फ्लुएंजा ए और बी के लिए प्रौद्योगिकी का पता लगाने और इन्फ्लूएंजा वायरस के ए और बी भेदभाव हम शो के लिए एक इज़ोटेर्माल प्रवर्धन पर आधारित है परीक्षा है प्रतिनिधि परिणाम संग्रहीत, जमे हुए एनपीएस वीटीएम नमूनों का एक पैनल पर इन्फ्लूएंजा ए और बी परख के प्रदर्शन को प्रदर्शित करने के लिए के रूप में एक आणविक आधारित श्वसन पैनल परख की तुलना में मूल्यांकन किया गया था।
टी मूल्यों के साथ नमूनों के लिए अधिक बार मनाया गया, सुझाव है कि परख द्वारा कम का पता लगाने दर कम वायरल titers के साथ जुड़े थे। परख इन्फ्लूएंजा वायरस एक 90.2% संवेदनशीलता और 98.1% विशिष्टता के साथ एक का पता लगाने के ऊपर इन्फ्लूएंजा वायरस बी पर पता लगाने के लिए एक बेहतर प्रदर्शन किया था। यहाँ के परिणाम पहले प्रकाशित साहित्य 26, 27, 28 के साथ संगत कर रहे हैं।
इस अध्ययन में दो महत्वपूर्ण सीमाएँ हैं। सबसे पहले, नमूने मंच पर परीक्षण के लिए वीटीएम में संग्रहीत किया गया। बहरहाल, समय के नमूनों का परीक्षण किया गया, पर मंच इस नमूने प्रकार के लिए एफडीए अनुमोदन नहीं था। इसलिए, वीटीएम में कमजोर पड़ने, कम हो सकता हैकम अनुमापांक वीटीएम नमूनों की जांच। दूसरा, नमूनों कि और बी परख इन्फ्लुएंजा एक साथ परीक्षण किया गया 6 से 9 महीनों आरपी परीक्षण जबकि परीक्षण करने से पहले ताजा नमूनों के तुरंत बाद वे प्राप्त हुए थे पर किया गया था के लिए -70 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत किया गया था। यह संभव है कि नमूनों ठंड आगे नमूनों में इन्फ्लूएंजा का पता लगाने के लिए कम।
इन्फ्लूएंजा ए और बी परख कुछ कदम है और प्रदर्शन करने के लिए सरल है। हालांकि, वहाँ दो महत्वपूर्ण कदम है कि उचित रूप से पूरा किया जाना चाहिए रहे हैं और उन निवारण कर सकते हैं कि अगर वे त्रुटियों का अनुभव। सबसे पहले, जब शुरू परख की स्थापना, स्थानांतरण कारतूस परीक्षण आधार करने के लिए जब तक वे जगह में क्लिक जुड़ा होना चाहिए। इन दो टुकड़े उचित रूप से सुरक्षित नहीं हैं, तो रन असफल हो जायेगी और शुरू से ही बार-बार करने की आवश्यकता होगी। दूसरा, साधन नमूना जोड़ने से पहले 2 मिनट के लिए गर्म करने के लिए की जरूरत है। इस समय तक गर्म करने के बाद, उपयोगकर्ताओं, नमूना जोड़ने कनेक्ट हस्तांतरण ग के लिए 30 सेकंड हैपरीक्षण आधार करने के लिए artridge, और ढक्कन बंद कर दें। यदि समय गुजरता है इससे पहले यह कदम पूरा हो गया है, साधन रन असफल हो जायेगी और नमूना की स्थापना की शुरुआत से दोहराया जा करना होगा।
परख की सीमाओं से थोड़ा सांस पैनल की तुलना में बढ़ शामिल हाथों पर समय और कम संवेदनशीलता और आगे इन्फ्लूएंजा ए उपप्रकार नहीं है, केवल नमूना प्रकार है कि परख के साथ इस्तेमाल किया जा सकता nasopharyngeal swabs या एनपीएस में संग्रहित कर रहे हैं वायरल परिवहन मीडिया; इस तरह के कम श्वसन नमूनों के रूप में किसी अन्य नमूना प्रकार, के लिए परख के प्रदर्शन का मूल्यांकन नहीं किया गया है। यह ध्यान रखें कि इस प्रोटोकॉल में सभी चरणों के लिए महत्वपूर्ण हैं महत्वपूर्ण है। प्रोटोकॉल के रूप में लिखा से किसी भी संशोधन या विचलन कम प्रदर्शन में या परख का परिणाम हो सकता है और उपयोगकर्ता द्वारा मूल्यांकन किया जाना चाहिए। प्रौद्योगिकी के लाभ के साधन एक छोटा निशान है वह यह है कि केवल 15 मिनट लगते हैं प्रदर्शन करने के लिए और यहां तक कि प्रौद्योगिकी हालांकि,आणविक विधियों पर आधारित है, विशेष प्रशिक्षण या योग्यता की आवश्यकता नहीं है प्रदर्शन करने के लिए। इन्फ्लुएंजा ए और बी इस अध्ययन में मूल्यांकन परख इन्फ्लूएंजा के निदान के लिए RIDTs के लिए एक विकल्प के रूप में काम करने की क्षमता है। प्रणाली, एक छोटी कुल परीक्षण समय का लाभ दिया है एक छोटा निशान है और प्रयोग करने में आसान है। कुल मिलाकर, उपकरण का डिजाइन बिंदु का ख्याल परीक्षण के लिए उपयुक्त है।
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Alere i Instrument | Alere | NAT-000 (Global), NAT-024 (US) | |
Alere i Influenza A & B 24 Test Kit | Alere | 425-000 (Global), 425-024 (US) | |
Alere i Barcode Scanner | Alere | EQ001001 | |
Alere Universal Printer | Alere | 55115 (Global), alereiprinter (US) | |
200 µl precision pipette | |||
200 µl disposable pipette tips | |||
Viral transport medium | Remel | M4-RT |
References
- Prevention control of seasonal influenza with vaccines. Recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices--United States, 2013-2014. , Report No. 1057-5987 1-43 (2013).
- Poehling, K. A., et al. The Underrecognized Burden of Influenza in Young Children. New England Journal of Medicine. 355 (1), 31-40 (2006).
- Estimates of Deaths Associated with Seasonal Influenza --- United States, 1976-2007. MMWR. 59 (33), 1057-1089 (2010).
- Agrawal, A. S., et al. Comparative evaluation of real-time PCR and conventional RT-PCR during a 2 year surveillance for influenza and respiratory syncytial virus among children with acute respiratory infections in Kolkata, India, reveals a distinct seasonality of infection. Journal of Medical Microbiology. 58 (12), 1616-1622 (2009).
- Ginocchio, C. C. Strengths and Weaknesses of FDA-Approved/Cleared Diagnostic Devices for the Molecular Detection of Respiratory Pathogens. Clinical Infectious Diseases. 52, suppl 4 312-325 (2011).
- Grohskopf, L. A., et al. Prevention and control of seasonal influenza with vaccines: recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices-United States, 2013-2014. MMWR Recomm Rep. 62 (07), 1-43 (2013).
- Molinari, N. -A. M., et al. The annual impact of seasonal influenza in the US: measuring disease burden and costs. Vaccine. 25 (27), 5086-5096 (2007).
- Aoki, F. Y., et al. Early administration of oral oseltamivir increases the benefits of influenza treatment. Journal of Antimicrobial Chemotherapy. 51 (1), 123-129 (2003).
- Noyola, D. E., Demmler, G. J. Effect of rapid diagnosis on management of influenza A infections. The Pediatric infectious disease journal. 19 (4), 303-307 (2000).
- Sharma, V., Dowd, M., Slaughter, A. J., Simon, S. D. EFfect of rapid diagnosis of influenza virus type a on the emergency department management of febrile infants and toddlers. Archives of Pediatrics & Adolescent Medicine. 156 (1), 41-43 (2002).
- Dale, S. E., Mayer, C., Mayer, M. C., Menegus, M. A. Analytical and clinical sensitivity of the 3M rapid detection influenza A+B assay. J Clin Microbiol. 46 (11), 3804-3807 (2008).
- van Doorn, H. R., et al. Clinical validation of a point-of-care multiplexed in vitro immunoassay using monoclonal antibodies (the MSD influenza test) in four hospitals in Vietnam. J Clin Microbiol. 50 (5), 1621-1625 (2012).
- Hurt, A. C., Alexander, R., Hibbert, J., Deed, N., Barr, I. G. Performance of six influenza rapid tests in detecting human influenza in clinical specimens. Journal of Clinical Virology. 39 (2), 132-135 (2007).
- Fiore, A. E., et al. Antiviral agents for the treatment and chemoprophylaxis of influenza --- recommendations of the Advisory Committee on Immunization Practices (ACIP). MMWR Recomm Rep. 60 (1), 1-24 (2011).
- Harper, S. A., et al. Seasonal influenza in adults and children--diagnosis, treatment, chemoprophylaxis, and institutional outbreak management: clinical practice guidelines of the Infectious Diseases Society of America. Clin Infect Dis. 48 (8), 1003-1032 (2009).
- Hannoun, C., Tumova, B. Survey on influenza laboratory diagnostic and surveillance methods in Europe. European Journal of Epidemiology. 16 (3), 217-222 (2000).
- Leonardi, G. P. Rapid identification of 2009 H1N1 influenza A virus using fluorescent antibody methods. Am J Clin Pathol. 134 (6), 910-914 (2010).
- Chartrand, C., Leeflang, M. M. G., Minion, J., Brewer, T., Pai, M. Accuracy of Rapid Influenza Diagnostic TestsA Meta-analysis. Annals of Internal Medicine. 156 (7), 500-511 (2012).
- Lee, G. C., et al. Evaluation of a rapid diagnostic test, NanoSign(R) Influenza A/B Antigen, for detection of the 2009 pandemic influenza A/H1N1 viruses. Virol J. 7, 244 (2010).
- Tang, Y. W., et al. Clinical accuracy of a PLEX-ID flu device for simultaneous detection and identification of influenza viruses A and B. J Clin Microbiol. 51 (1), 40-45 (2013).
- Bandt, D., et al. Economic high-throughput-identification of influenza A subtypes from clinical specimens with a DNA-oligonucleotide microarray in an outbreak situation. Molecular and Cellular Probes. 26 (1), 6-10 (2012).
- Pierce, V. M., Elkan, M., Leet, M., McGowan, K. L., Hodinka, R. L. Comparison of the Idaho Technology FilmArray system to real-time PCR for detection of respiratory pathogens in children. J Clin Microbiol. 50 (2), 364-371 (2012).
- Teo, J., et al. VereFlu™: an integrated multiplex RT-PCR and microarray assay for rapid detection and identification of human influenza A and B viruses using lab-on-chip technology. Archives of Virology. 156 (8), 1371-1378 (2011).
- Babady, N. E., et al. Comparison of the Luminex xTAG RVP Fast assay and the Idaho Technology FilmArray RP assay for detection of respiratory viruses in pediatric patients at a cancer hospital. J Clin Microbiol. 50 (7), 2282-2288 (2012).
- Chidlow, G., et al. Duplex real-time reverse transcriptase PCR assays for rapid detection and identification of pandemic (H1N1) 2009 and seasonal influenza A/H1, A/H3, and B viruses. J Clin Microbiol. 48 (3), 862-866 (2010).
- Bell, J. J., Selvarangan, R. Evaluation of the Alere I influenza A&B nucleic acid amplification test by use of respiratory specimens collected in viral transport medium. J Clin Microbiol. 52 (11), 3992-3995 (2014).
- Nie, S., et al. Evaluation of Alere i Influenza A&B for Rapid Detection of Influenza Viruses A and B. Journal of Clinical Microbiology. 52 (9), 3339-3344 (2014).
- Chapin, K. C., Flores-Cortez, E. J. Performance of the Molecular Alere i Influenza A&B Test Compared to That of the Xpert Flu A/B Assay. Journal of Clinical Microbiology. 53 (2), 706-709 (2015).