Этот протокол описывает новый метод для сравнения 3D цельной сердечной ткани миокарда с МРТ. Она предназначено для точной оценки интрамиокардиальных инъекций в пограничной зоне инфаркта хронической модели свиньи инфаркт миокарда.
Сердечные регенеративные терапии направлены на защиту и ремонт травмированного сердца у пациентов с ишемической болезнью сердца. Вводя стволовые клетки или другие биологические препараты, которые повышают ангио- или васкулогенез в пограничной зону инфаркта (IBZ), тканевая перфузия улучшается, и миокард может быть защищена от дальнейшего повреждения. Для достижения максимального терапевтического эффекта, он выдвинул гипотезу о том, что регенеративное вещество лучше всего поставлено на IBZ. Это требует точных инъекций и привел к разработке новых методов инъекций. Для проверки этих новых методов, мы разработали протокол проверки на основе анализа ткани миокарда. Этот протокол включает в себя целое сердце обработки ткани миокарда, которая позволяет подробный двумерный (2D) и трехмерной (3D) анализ сердечной анатомии и интрамиокардиальных инъекций. В свинью, инфаркт миокарда был создан 90-минутной окклюзии левой передней нисходящей коронарной артерии. Четыре недели спустя, микстЮр гидрогель с суперпарамагнитными частицами оксида железа (SPIOs) и флуоресцентными шариками вводили в IBZ с использованием минимально-инвазивным эндокардом подхода. 1 ч после процедуры инъекции, свинья была умерщвлены, и сердце вырезали и помещали в агарозе (агар). После затвердевания агара, были проведены магнитно-резонансная томография (МРТ), нарезка сердца и визуализация флуоресценции. После того, как изображение после обработки, 3D-анализ был проведен для оценки точности ориентации IBZ. Этот протокол обеспечивает структурированный и воспроизводимый метод для оценки точности ориентации интрамиокардиальных инъекций в IBZ. Протокол может быть легко использован, когда обработка рубцовой ткани и / или проверки точности впрыска всего сердца желательно.
Ишемическая болезнь сердца является ведущей в мире причина смерти в течение последних десятилетий 1. Острое лечение после инфаркта миокарда является восстановление кровотока в миокарде с помощью чрескожного коронарного вмешательства или коронарного шунтирования. В тяжелых инфарктов, большая площадь миокарда шрамы, и эти случаи часто приводят к ишемической сердечной недостаточности (СН) 2. Современные варианты лечения ВЧ внимание профилактике и сохранению функции сердца для пациентов с СН, но не на регенерацию.
В течение последнего десятилетия, сердечная регенеративная терапия была исследована как вариант лечения для HF 3. Эта терапия стремится поставлять биопрепараты, такие как стволовые клетки или факторы роста, непосредственно травмированный миокард , чтобы вызвать реваскуляризации, защиту кардиомиоцитов, дифференцировку и рост 4. Для оптимальнойтерапевтический эффект, она выдвинута гипотеза о том , что биологическое должен быть введен в зону инфаркта границы (IBZ) для облегчения хорошей тканевой перфузии для выживания биологического и для оптимального эффекта в целевой зоне 5, 6. Несколько методы были разработаны , чтобы выполнить идентификацию и визуализацию IBZ , чтобы направлять интрамиокардиальную инъекцию 7, 8, 9, 10, 11. Помимо идентификации и визуализации IBZ, доставка также опирается на биоматериалов и нагнетательных катетеров, используемых. Для проверки точности впрыска методов доставки, требуется точный и воспроизводимый метод количественного определения.
Мы разработали протокол для целого сердца обработки ткани миокарда, который предлагает двумерный (2D) и трех-dimensioNAL (3D) изображения, которые могут быть использованы для качественного и количественного анализа целей. Протокол охватывает процесс встраивания и анализ цифрового изображения. В данной работе мы демонстрируем протокол для оценки точности ориентации интрамиокардиальных инъекций в IBZ в большом свиных модель хронического инфаркта миокарда.
Всего-сердце 3D обработки ткани миокарда в соответствии с этим протоколом обеспечивает структурированный метод, который позволяет 3D-анализ миокарда, в IBZ и выполненные инъекций по отношению к сердечной анатомии. Объем наполнения сердца зависит от желаемого анализа. В данном исследован…
The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы поблагодарить Марлижн Янсен, Джойс Виссер и Martijn ван Nieuwburg за помощь при проведении экспериментов на животных. Мы очень признаем Martijn Froeling и Анк Вассинк за помощь с МРТ.
0.9% Saline | Braun | ||
Agarose | Roche Diagnostics | Scientific grade multipurpose agar | |
Biomolecular fluorescence scanner Typhoon 9410 | GE Healthcare | ||
Embedding container | Plastic, dimensions 17 x 14,5 x 14 cm | ||
FluoSpheres Polystyrene Microspheres | Invitrogen | F8834 | red, 10 µm |
Gadolinium | Gadovist | 1,0 mmol/mL | |
dS 32 channel head coil | Philips | Or similar | |
Matlab | Mathworks | To insure compatability 2015a or newer | |
Meat slicer | Berkel | ||
Myostar injection catheter | Biosense Webster | ||
Super paramagnetic iron oxide particles | Sinerem | ||
Triphenyl-tetrazolium chloride | Merck | ||
UPy-PEG10k | |||
Vicryl 2-0 | Ethicon |