Modélisation de la mort neuronale et la dégénérescence de neurones granules primaires de cervelet de souris

Matthew Laaper; Takrima Haque; Ruth S. Slack; Arezu Jahani-Asl

doi:10.3791/55871

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Article de méthode

Modélisation de la mort neuronale et la dégénérescence de neurones granules primaires de cervelet de souris

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DOI :

10.3791/55871

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6 novembre 2017

Matthew Laaper¹^,² , Takrima Haque¹ , Ruth S. Slack³ , Arezu Jahani-Asl¹^,²^,⁴

¹Lady Davis Institute for Medical Research, Jewish General Hospital, ²Integrated Program in Neuroscience, McGill University, ³Department of Cellular and Molecular Medicine, University of Ottawa, ⁴Department of Oncology, Faculty of Medicine, McGill University

Dans cet article

Résumé

Ce protocole décrit une méthode simple pour isoler et cultiver les neurones de granule cérébral de souris primaire (SCT) de petits 6-7 jours vieux, transduction efficace du SCT pour la perte et gain d’études de fonction et modélisation excitotoxicité neuronale induite par le NMDA, la mort cellulaire induite par la basse-potassium, lésions de l’ADN et le stress oxydatif en utilisant le même modèle de culture.

Résumé

Neurones cérébelleux granule (SCT) sont un modèle neuronal fréquemment utilisé, formant une abondante population homogène dans le cervelet. Compte tenu de leur développement après l’accouchement, l’abondance et l’accessibilité, SCT est un modèle idéal pour étudier les processus neuronaux, y compris le développement neuronal, la migration neuronale et la stimulation de l’activité neuronale physiologique. En outre, cultures CGN fournissent un excellent modèle pour l’étude des différents modes de mort cellulaire, y compris l’excitotoxicité et l’apoptose. Moins d’une semaine dans la culture, SCT exprime des récepteurs N-méthyl-D-aspartate (NMDA), un récepteur de glutamate ionotropiques spécifiques avec de nombreuses fonctions essentielles de santé neuronale et la maladie. L’ajout de faibles concentrations de NMDA en conjonction avec la dépolarisation de la membrane pour rongeurs cultures primaires de CGN a été utilisée pour modéliser la stimulation de l’activité neuronale physiologique tandis que l’ajout de concentrations élevées de NMDA peut être employée pour modéliser lésions neuronales excitotoxiques. Ici, une méthode d’isolement et de culture du SCT de chiots âgés de 6 jours ainsi que la manipulation génétique du SCT par adénovirus et lentivirus sont décrits. Nous avons également présents protocoles optimisés sur la façon de stimuler l’excitotoxicité induite par le NMDA, l’apoptose induite par la basse-potassium, stress oxydatif et lésions de l’ADN après transduction de ces neurones.

Introduction

Neurones cérébelleux granule (SCT) sont bien caractérisés en culture et ont servi comme un modèle efficace pour étudier la mort neuronale et développement ¹^,²^,³^,⁴^,⁵^, ⁶. l’expression précoce des récepteurs N-méthyl-D-aspartate (NMDA) en CGN cultures in vitro rend un modèle attrayant pour étudier NMDA induite par la signalisation. L’activation de ces récepteurs NMDA en conjonction avec la dépolarisation de la membrane est utilisée pour modéliser la stimulation de l’....