Culture organotypique en trois dimensions des organes sensoriels vestibulaires et auditives

Ksenia Gnedeva; A. J. Hudspeth; Neil Segil

doi:10.3791/57527

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Article de méthode

Culture organotypique en trois dimensions des organes sensoriels vestibulaires et auditives

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DOI :

10.3791/57527

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1 juin 2018

Ksenia Gnedeva¹^,² , A. J. Hudspeth³ , Neil Segil¹^,²

¹Department of Stem Cell Biology and Regenerative Medicine, Keck School of Medicine of the University of Southern California, ²Caruso Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Keck School of Medicine of the University of Southern California, ³Howard Hughes Medical Institute and Laboratory of Sensory Neuroscience, The Rockefeller University

Dans cet article

Résumé

Cultures organotypique tridimensionnelle de l’utricule murin et la cochlée en défricher collagène j’ai gélifie morphologie tissulaire innée preserve optiquement, permettant une stimulation mécanique au moyen d’ajustement de la rigidité de la matrice et permettent la livraison de gène induite par le virus.

Résumé

Les organes sensoriels de l’oreille interne sont difficiles à étudier chez les mammifères en raison de leur inaccessibilité aux manipulations expérimentales et d’observation optique. En outre, bien que des techniques de culture existants permettent des perturbations biochimiques, ces méthodes ne fournissent pas un moyen d’étudier les effets de la force mécanique et la rigidité des tissus pendant le développement de l’oreille interne des organes sensoriels. Nous décrivons ici une méthode pour la culture organotypique tridimensionnelle de l’utricule murine intact et cochlée qui permet de surmonter ces limitations. La technique pour l’ajustement d’une rigidité de la matrice tridimensionnelle décrite ici permet la manipulation de la force élastique s’opposant à la croissance des tissus. Cette méthode peut donc être utilisée pour étudier le rôle des forces mécaniques au cours du développement de l’oreille interne. En outre, les cultures permettent la livraison de gène induite par le virus, qui peut être utilisée pour des expériences de gain - et perte de fonction. Cette méthode de culture préserve innée des cellules ciliées et des cellules et sert comme une alternative potentiellement supérieure à la culture traditionnelle à deux dimensions des organes sensoriels vestibulaires et auditives.

Introduction

L’étude de la plupart des aspects du développement des organes de mammifères a été facilitée par les systèmes in vitro . Deux méthodes principales sont maintenant utilisées pour la culture des organes sensoriels vestibulaires : flottant¹ et adhérentes² préparations. Les deux méthodes permettent l’étude des cellules ciliées vulnérabilités³ et régénération¹^,⁴ in vitro. En outre, le rôle du développement de l’encoche⁵^,⁶, Wnt⁷^,