Cellulaire et acellulaire poumon modèle pour étudier les métastases tumorales

Résumé

Nous présentons ici un protocole pour un ex vivo du poumon Cancer du modèle qui imite les étapes de la progression tumorale et contribue à isoler une tumeur primaire, diffuser les cellules tumorales et les lésions métastatiques.

Résumé

Il est difficile d’isoler des cellules tumorales à différents moments de la progression tumorale. Nous avons créé un modèle ex vivo du poumon qui peut montrer l’interaction des cellules tumorales avec une matrice naturelle et un flux continuel d’éléments nutritifs, ainsi qu’un modèle qui montre l’interaction des cellules tumorales avec les composants cellulaires normales et naturelles de la matrice. Le modèle de poumon acellulaire ex vivo est créé en isolant un bloc coeur-poumon de rat et enlever toutes les cellules en utilisant le procédé de DÉCELLULARISATION. La bronche principale droite est liée au large et les cellules tumorales sont placés dans la trachée par une seringue. Les cellules se déplacent et remplir le poumon gauche. Le poumon est ensuite placé dans un bioréacteur où l’artère pulmonaire reçoit un flux continu de médias dans un circuit fermé. La tumeur sur le poumon gauche est la tumeur primitive. Les cellules tumorales qui sont isolées dans les médias circulants sont en circulation les cellules tumorales et les cellules tumorales dans le poumon droit sont des lésions métastatiques. Le modèle de poumon cellulaires ex vivo est créé en sautant le processus DÉCELLULARISATION. Chaque modèle peut être utilisé pour répondre aux questions de recherche différents.

Introduction

Métastases du cancer est le coupable derrière la plupart des décès liés au cancer et pose le défi ultime dans l’effort pour combattre le cancer. L’objectif général de cette méthode est de concevoir un protocole pour une culture de quatre dimensions (4D) cellulaire qui a une dimension de flux, en plus de la croissance tridimensionnelle (3d) cellulaire. Il représente les trois phases du processus de métastase [c'est-à-dire, la tumeur primitive, tumeur cellules circulantes (CTC) et lésions métastatiques].

Durant les trois dernières décennies, les scientifiques du monde entier a donné une richesse inégalée d’informations pour comprendr....

Protocole

Les protocoles pour l’expérimentation animale ont été approuvés par le Comité de l’urbanisme à l’Institut de recherche de méthodiste de Houston et d’institutionnels animalier et effectuées conformément à tous les règlements, lois, directives et politiques.

1. récolte de poumon de rat

1. Anesthésier un rat Sprague-Dawley mâle de 4 à 6-semaines par injection intrapéritonéale (IP) de kétamine (100 mg/kg) et de xylazine (10 mg/kg) dans son flanc. S’assurer que l’anesthésie en vérifiant l’absence de mouvement quand l’orteil du membre postérieur est pincé avec une pince.
2. Après 10 min, raser la poitrine et l’abdomen et essuyer la ....

Résultats

Le poumon récolté rat maintient intact système vasculaire et les alvéoles¹¹ (figures 3 a et 3 b). Après DÉCELLULARISATION, les composants de la matrice extracellulaire d’un poumon acellulaire, telles que l’élastine, collagène et la fibronectine sont préserver¹¹ (Figure 3, 3D, 3Eet 3F). La DÉCELLULARISATION conduit à.......

Discussion

Le poumon de 4D ex vivo fournit l’occasion d’étudier la croissance tumorale et les métastases dans une configuration de laboratoire. Une matrice de poumon natif est un système complexe qui offre un soutien aux tissus normaux et maintient les interactions cellule-cellule, interactions cellule-matrice, différenciation cellulaire et organisation tissulaire. Il offre la possibilité d’ajouter des composants de microenvironnement tumoral pour étudier leurs effets sur la croissance tumorale et l’interaction avec d’autr.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Sprague Dowley rat	Harlan	206M	Écouvillon mâle
la chlorhexidine	Prevantics, NY, USA	NDC 10819-1080-1
Heparine	Sagent Pharmaceuticals, Schaumburg, IL, USA	NDC 25021-400-10
Aiguille de calibre 18	McMaster Carr, USA	75165A249
2-0 cravate en soie	Ethicon, San Angelo, TX, USA	A305H
Pompe Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07554-80
Tête de pompe Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07519-05
Cartouche de pompe Masterflex L/S	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-07519-70
Tube Tygon	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	14171211
Tube de pompe MasterFlex	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	06598-16
Connecteurs Luer lock femelles	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-34	75165A249
Connecteurs Luer lock mâles	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45513-04
anneau en nylon noir	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	EW-45509-04
Set intraveineux	CareFusion	41134E
Dodécylsulfate de sodium (FDS)	Fisher Scientific	CAS151-21-3
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Antibiotiques	Gibco	15240-062
Oxygénateur en silicone	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, États-Unis	ABW00011	Saint-GoBain-Wire
mesh	1164610105	Lowes	New York Fil
Femelle luer Lug Style TEE	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-56
Bague de verrouillage intégrale luer mâle à la série 200 Barb	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45518-08
Coupleur de style filetage luer femelle	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	45508-22
Connecteur Clave	ICU Medical	11956
Hi-Flo et commerce ; Robinet d’arrêt 4 voies avec serrure luer mâle pivotante	Médical	MX9341L
MasterFlex Tube de pompe	Cole-Parmer, Vernon Hills, IL, USA	06598-13	pour canule

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