台湾绿蜂胶的提取与分析
Summary
我们提出了一个协议, 使用乙醇作为溶剂提取和表征台湾绿色蜂胶, 具有抗菌活性。
Abstract
台湾绿色蜂胶富含前乳化类黄酮类化合物, 具有广泛的生物活性, 如抗氧化剂、抗菌药和抗癌类。台湾绿色蜂胶的生物活性化合物为丙二醇, 即 c、d、f 和 g。台湾绿色蜂胶中的蜂胶浓度因季节和地理位置而异。因此, 建立一个标准的、可重复的程序来确定台湾绿色蜂胶的质量是至关重要的。在这里, 我们提出了一个协议, 使用乙醇为基础的提取, 高效液相色谱, 和抗菌活性分析, 以表征台湾绿色蜂胶质量。该方法表明, 95% 和99.5% 乙醇提取物可实现台湾绿色蜂胶的最大干物质产量, 从而产生具有抗菌性能的最高浓度的丙氨酸。根据这些发现, 本协议被认为是确定台湾绿色蜂胶质量的可靠和可重复的。
Introduction
蜂胶是由蜜蜂品种阿皮斯·梅莱夫生产的一种天然树脂混合物。蜂胶自古以来就被广泛用于民间医药。最近的一项研究报告说, 蜂胶有利于预防微生物感染和炎症1。大量研究表明, 蜂胶中的主要生物活性化合物是黄酮类化合物、酚酸酯、婚前性p-香豆酸和二戊酸 2,3。通过高效液相色谱法 (hplc)4、5、6、7, 测定了台湾绿蜂胶中10种婚前黄酮衍生物。其中最丰富的是丙二醇 c、d、f和 g 5、7。台湾绿色蜂胶具有相当大的生物效应, 与其高含量的丙氨酸8有关。
蜂胶中生物活性化合物的浓度因获得蜂胶的季节和地理位置而有很大差异。欧洲蜂胶主要含有黄酮类和酚酸 9.巴西蜂胶中的主要生物活性化合物是婚前的p-香豆酸, 如青蒿素 c10.一项研究表明, 该季节是决定台湾绿色蜂胶 11中总丙氨酸含量的关键因素。台湾绿色蜂胶中的丙蛋白含量在夏季 (5月至7月) 最高, 在冬季最低。蜂胶的抗菌性能被广泛认为是生物活性的指标。一般来说, 从各地区采集的蜂胶样品具有类似的抗菌性能;例如, 它通常对几乎所有革兰氏阳性细菌有效, 对革兰氏阴性菌10、12、13 具有有限的抗菌作用。结果表明, 蜂胶中黄酮类化合物之间的协同作用具有抗菌作用.同样, 据报道, 台湾绿色蜂胶对革兰氏阳性菌有抗菌作用。此外, 一项研究还确定了在台湾绿色蜂胶8中, 丙氨酸相互作用的抗菌作用。
蜂胶中生物活性化合物的特性是困难的, 因为其化学成分可能因其来源而异。因此, 有必要建立一种可行的、可重复的方法来确定台湾绿色蜂胶的质量。然而, 台湾绿色蜂胶提取和随后的功能分析还没有建立标准程序。提出了几种不同应用有机和无机溶剂的蜂胶提取方法 16、17、18、19、20.由于蜂胶是一种亲脂性混合物, 研究表明, 有机萃取比无机萃取物的提取物好于无机萃取物8、18、19.台湾绿色蜂胶中的总丙蛋白浓度及其抗菌性能是衡量台湾绿色蜂胶质量的关键指标。因此, 本研究的目的是提出一种利用乙醇作为溶剂提取和表征台湾绿色蜂胶抗菌性能的方案。
Protocol
1. 乙醇提取化合物的制备 重量10克冷冻台湾绿色蜂胶, 这是从台湾蜂箱收集的 5月至7月, 并使用香料研磨机磨碎。确认整片台湾绿色蜂胶被磨成细粉, 没有任何大颗粒。 加入100毫升的各种浓度的乙醇 (60%, 70%, 80%, 95% 和 99.5%) 和水分离烧瓶, 并混合每个浓度的10克地面蜂胶。 在25°c 下孵化, 并在250转/分的温度下摇瓶48小时。 通过孔径为25μm 的滤纸过滤乙醇提取物。 <li…
Representative Results
乙醇提取的积极代表性数据见表 1。台湾绿蜂胶的干物质产量与乙醇的浓度呈正相关。95% 和99.5% 乙醇提取物的干物质产量最高。以水为萃取溶剂, 台湾绿色蜂胶的干物质产率最低。这些结果表明, 乙醇等有机溶剂在台湾绿色蜂胶提取中表现最佳。使用高效液相色谱法 (图 1a) 识别和量化标准丙氨酸 c、d、f 和 g 的信号。用单独的丙氨酸标准?…
Discussion
一项研究报告说, 使用不同浓度的乙醇进行浸渍可用于巴西蜂胶提取17;然而, 这一过程是耗时的17。从巴西蜂胶17中提取酚类生物活性化合物 (如酚类化合物) 至少需要10天。另外, 乙醇萃取结合加热在 37°c, 50°c, 或 70°c 30分钟, 已被建议提取巴西蜂胶19,21,22.根据乙醇<sup class="xre…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这份手稿是由华莱士学术编辑编辑。
Materials
| ethanol | Sigma-Aldrich | E7023 | |
| Whatman no. 4 filter paper | Sigma-Aldrich | WHA1004125 | |
| methanol | Sigma-Aldrich | 34860 | |
| reverse phase RP-18 column | Phenomenex Inc. | 00G-0234-E0 | |
| Staphylococcus aureus | ATCC | BCRC 10780 | |
| Escherichia coli | ATCC | BCRC 10675 | |
| tryptic soy broth | Sigma-Aldrich | 22092 | |
| nutrient broth | Sigma-Aldrich | 70122 | |
| dimethyl sulfoxide | Sigma-Aldrich | D2650 | |
| spice grinder | Waring | WSG60K | |
| microplate Reader | Molecular Devices | EMAX PLUS | |
| HPLC system | Agilent | 1200 Series | |
| vacuum evaporation | BÜCHI | Rotavapor R-215 |
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Citer Cet Article
Chen, C., Chien, Y., Yu, Y., Chen, Y. Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis. J. Vis. Exp. (143), e58743, doi:10.3791/58743 (2019).