Udvinding og analyse af taiwanske grønne Propolis

Summary

Vi præsenterer en protokol til brug af ætanol som opløsningsmiddel til at udtrække og karakterisere taiwanske grønne propolis, der udstiller antibakterielle aktivitet.

Abstract

Taiwanske grønne propolis er rig på prenylated flavonoider og udstiller en bred vifte af biologiske aktiviteter, såsom antioxidant, antibakterielle, og anticancer ones. De bioaktive stoffer af taiwanske grønne propolis er propolins, nemlig C, D, F og G. Koncentrationen af propolins i taiwanske grønne propolis varierer afhængigt af sæson og geografisk placering. Det er således afgørende at indføre en standard og repeterbare procedure for bestemmelse af kvaliteten af taiwanske grønne propolis. Vi præsenterer her, en protokol, der bruger ethanol-baseret udvinding, high-performance væskekromatografi og antibakterielle aktivitet analyse for at karakterisere taiwanske grønne propolis kvalitet. Denne metode angiver, at 95% og 99,5% ethanol ekstraktioner opnå maksimal tørstof udbyttet fra taiwanske grønne propolis, hvilket giver de højeste koncentrationer af propolins, der har antibakterielle egenskaber. Ifølge disse resultater anses denne protokol for pålidelige og repeterbare for bestemmelse af kvaliteten af taiwanske grønne propolis.

Introduction

Propolis er et naturligt harpiksholdige blanding fremstillet af arternes bi Apis mellifera. Propolis har været bredt anvendt siden oldtiden i folkemusik medicin. En undersøgelse for nylig rapporteret, at propolis er gavnlige for at forhindre mikrobielle infektioner og betændelse¹. Talrige undersøgelser har vist, at de vigtigste bioaktive stoffer i propolis er flavonoider, phenol acid estere, prenylated p-coumaric syrer og diterpenic syrer^2,3. Til dato, er 10 prenylated flavanone derivater fra taiwanske grønne propolis blevet identificeret gennem high-performance væskekromatografi (HPLC)^4,5,6,7. Den mest udbredte blandt disse er propolins C, D, F og G^5,7. De store biologiske effekter af taiwanske grønne propolis er korreleret med dens høje indhold af propolins⁸.

Koncentrationerne af bioaktive stoffer i propolis varierer meget afhængigt af sæson og geografiske placering som propolis er fremstillet. Europæiske propolis indeholder hovedsagelig flavonoid-aglycone og phenolforbindelser syrer-⁹. De store bioaktive stoffer i propolis fra Brasilien er prenylated p-coumaric syrer, såsom artepillin C¹⁰. En undersøgelse viste, at sæsonen er en kritisk faktor for bestemmelse af det samlede propolin indholdet i taiwanske grønne propolis¹¹. Propolin indhold i taiwanske grønne propolis er højeste om sommeren (maj – juli) og lavest i vinteren¹¹. Propolis antibakterielle ejendom har været almindeligt anset for at være en indikator for biologisk aktivitet. Generelt, prøver af propolis er indsamlet fra forskellige regioner har udstillet en lignende antibakterielle ejendom; for eksempel, det er generelt effektivt mod næsten alle gram-positive bakterier og udstiller en begrænset antibakterielle effekt mod gram-negative bakterier^10,12,13. Synergistisk interaktioner mellem flavonoider i propolis påvistes for at har en antibakteriel virkning¹⁴. På samme måde, taiwanske grønne propolis blev rapporteret at have en antimikrobiel virkning mod gram-positive bakterier¹⁵. Derudover identificeret en undersøgelse også en antimikrobiel virkning af vekselvirkninger mellem propolins i taiwanske grønne propolis⁸.

Karakterisering af de bioaktive stoffer i propolis er vanskeligt, fordi dens kemiske sammensætning kan variere alt efter sit udspring af oprindelse. Det er derfor nødvendigt at fastsætte en realistisk og repeterbare metode til bestemmelse af kvaliteten af den taiwanske grønne propolis. Dog er der opstillet ingen standardprocedure for taiwanske grønne propolis ekstraktion og efterfølgende funktionalanalyse. Flere metoder, der skiftevis gælder organiske og uorganiske opløsningsmidler har været foreslået for propolis udvinding^{16,17,18,19,20}. Da propolis er en lipofile blanding, har undersøgelser vist at økologisk udvinding er bedre end uorganiske udvinding^8,18,19. Den samlede propolin koncentration i taiwanske grønne propolis og dens antibakterielle egenskaber er vigtige indikatorer for kvaliteten af taiwanske grønne propolis. Formålet med denne undersøgelse er således, at præsentere en protokol til brug af ætanol som opløsningsmiddel til at udtrække og karakterisere de antibakterielle egenskaber af taiwanske grønne propolis.

Protocol

1. fremstilling af Ethanol-udvundet forbindelser Vejer 10 g frosne taiwanske grønne propolis, som blev indsamlet fra bistader i Taiwan fra maj til juli, og male det ved hjælp af krydderi kværn. Bekræfte, at hele stykker af taiwanske grønne propolis er malet til et fint pulver uden nogen store partikler. Der tilsættes 100 mL af forskellige koncentrationer ethanol (60%, 70%, 80%, 95% og 99,5%) og vand til at adskille kolber og mix hver koncentration med 10 g af jorden propolis. Der inkub…

Representative Results

Positive repræsentative data for ethanol udvinding er præsenteret i tabel 1. Tørstof udbyttet fra taiwanske grønne propolis var positivt forbundet med koncentrationen af ethanol. 95% og 99,5% ethanol uddragene havde den højeste tørstof udbytte fra taiwanske grønne propolis. Det laveste tørstof udbytte fra taiwanske grønne propolis opstod når vand blev brugt som ekstraktionsmidlet. Disse resultater viser, at et organisk opløsningsmiddel, såsom ethanol, fungerer…

Discussion

En undersøgelse rapporterede, at udblødning, ved hjælp af forskellige koncentrationer af ethanol, kunne anvendes til brasilianske propolis udvinding¹⁷; Men, processen var tidskrævende¹⁷. Det tog mindst 10 dage til at udtrække de bioaktive stoffer, såsom phenol indhold, fra brasilianske propolis¹⁷. Alternativt, ethanol udvinding i kombination med opvarmning ved 37 ° C, 50 ° C og 70 ° C i 30 min er blevet foreslået til at udtrække brasilians…

Materials

ethanol	Sigma-Aldrich	E7023
Whatman no. 4 filter paper	Sigma-Aldrich	WHA1004125
methanol	Sigma-Aldrich	34860
reverse phase RP-18 column	Phenomenex Inc.	00G-0234-E0
Staphylococcus aureus	ATCC	BCRC 10780
Escherichia coli	ATCC	BCRC 10675
tryptic soy broth	Sigma-Aldrich	22092
nutrient broth	Sigma-Aldrich	70122
dimethyl sulfoxide	Sigma-Aldrich	D2650
spice grinder	Waring	WSG60K
microplate Reader	Molecular Devices	EMAX PLUS
HPLC system	Agilent	1200 Series
vacuum evaporation	BÜCHI	Rotavapor R-215