Utvinning og analyse av taiwanske grønne Propolis

Summary

Vi presenterer en protokoll for bruk av etanol som et løsemiddel og karakterisere taiwanske grønne propolis som viser antibakteriell aktivitet.

Abstract

Taiwanske grønne propolis er rik på prenylated flavonoider og utstillinger et bredt spekter av biologiske aktiviteter, for eksempel antioksidant, antibakterielle, og anticancer seg. Bioaktive forbindelser av taiwanske grønne propolis er propolins, nemlig C, D, F og G. Konsentrasjonen av propolins i taiwanske grønne propolis varierer avhengig av sesong og geografisk plassering. Derfor er det viktig å etablere en standard og repeterbare prosedyre for å bestemme kvaliteten på taiwanske grønne propolis. Her presenterer vi en protokoll som bruker etanol-baserte utvinning, høy ytelse flytende kromatografi og en antibakteriell aktivitetsanalyse for å karakterisere taiwanske grønne propolis kvalitet. Denne metoden angir at 95% og 99,5% etanol utdrag oppnå maksimal tørr saken avkastningen fra taiwanske grønne propolis, og dermed gir de høyeste konsentrasjonene av propolins som har antibakterielle egenskaper. Ifølge disse funnene som nåværende protokollen pålitelig og repeterbare for å bestemme kvaliteten på taiwanske grønne propolis.

Introduction

Propolis er en naturlig resinous blanding produsert av bee arten APIene mellifera. Propolis har vært mye brukt siden antikken i folk medisiner. En studie nylig rapportert at propolis er gunstig for å forebygge mikrobielle infeksjoner og betennelse¹. Mange studier har vist at de viktigste bioaktive forbindelsene i propolis er flavonoider, fenoliske syre estere, prenylated p-coumaric syrer og diterpenic syren^2,3. Hittil har 10 prenylated flavanone derivater fra taiwanske grønne propolis identifisert gjennom høy ytelse flytende kromatografi (HPLC)^4,5,6,7. Den mest tallrike blant disse er propolins C, D, F og G^5,7. Betydelig biologiske effekter av taiwanske grønne propolis er korrelert med dens høye innhold av propolins⁸.

Konsentrasjonen av bioaktive forbindelser i propolis variere avhengig av sesong og geografisk plassering som propolis er oppnådd. Europeiske propolis inneholder hovedsakelig flavonoid aglycone og fenoliske syrer⁹. Store bioaktive forbindelser i propolis fra Brasil er prenylated p-coumaric syrer, for eksempel artepillin C¹⁰. En studie viste at sesongen er en kritisk faktor for å bestemme det totale propolin innholdet i taiwanske grønne propolis¹¹. Propolin innholdet i taiwanske grønne propolis er høyest i sommer (mai – juli) og lavest i vinter¹¹. Antibakterielle eiendom propolis har blitt kjent som en indikator på biologiske aktivitet. Vanligvis har prøver av propolis fra ulike regioner vist en lignende antibakterielle eiendom; for eksempel det er vanligvis effektiv mot nesten alle gram-positive bakteriene og utstillinger en begrenset antibakteriell effekt mot gram-negative bakterier^10,12,13. Synergistisk interaksjoner mellom flavonoider i propolis ble vist for å ha en antibakteriell effekt¹⁴. Tilsvarende ble taiwanske grønne propolis rapportert å ha en antimikrobiell effekt mot gram-positive bakteriene¹⁵. Videre identifisert en studie også en antimikrobiell effekt fra samspillet av propolins i taiwanske grønne propolis⁸.

Karakterisering av bioaktive forbindelser i propolis er vanskelig fordi dens kjemiske sammensetning kan variere avhengig av kilden opprinnelsesland. Derfor er det nødvendig å etablere en mulig og repeterbare metode for å bestemme kvaliteten på den Taiwanske grønne propolis. Men er ingen standard prosedyre etablert for taiwanske grønne propolis utvinning og påfølgende funksjonell analyse. Flere metoder som blant annet bruker organiske og uorganiske løsemidler foreslått for propolis utvinning^{16,17,18,19,20}. Propolis er en lipofile blanding, har studier vist at organisk utvinning er bedre enn uorganiske utvinning^8,18,19. Den totale propolin konsentrasjonen i taiwanske grønne propolis og antibakterielle egenskaper er viktige indikatorer for kvaliteten på taiwanske grønne propolis. Dermed er formålet med denne studien å presentere en protokoll for bruk av etanol som et løsemiddel og prege det antibacterial eiendom av taiwanske grønne propolis.

Protocol

1. forberedelse av etanol-utpakkede forbindelser Veie 10 g frosne taiwanske grønne propolis, som ble samlet inn fra bikuber i Taiwan fra mai til juli, og male det med krydder jeksel. Bekreft at hele biter av taiwanske grønne propolis er bakken til et fint pulver uten noen store partikler. Legge til 100 mL ulike konsentrasjoner av etanol (60%, 70%, 80%, 95% og 99,5%) og vann til å skille flasker og bland hver konsentrasjon med 10 g av bakken propolis. Inkuber ved 25 ° C og riste flasken 2…

Representative Results

Positiv representant dataene for etanol utvinning er presentert i tabell 1. Tørket avkastningen fra taiwanske grønne propolis var positivt assosiert med konsentrasjonen av etanol. 95% og 99,5% etanol ekstrakter hadde høyest tørr saken gi fra taiwanske grønne propolis. Laveste tørrstoff avkastningen fra taiwanske grønne propolis oppstod under vann ble brukt som utvinning løsemiddelet. Disse resultatene indikerer at en organisk løsemiddel, som etanol, fungerer best…

Discussion

En studie rapportert at maserasjon, bruker ulike konsentrasjoner av etanol, kan brukes for brasilianske propolis utvinning¹⁷; prosessen var imidlertid tidkrevende¹⁷. Det tok minst 10 dager å trekke bioaktive forbindelser, for eksempel fenoliske innhold, fra brasilianske propolis¹⁷. Alternativt har etanol utvinning i kombinasjon med ved 37 ° C, 50 ° C eller 70 ° C i 30 min blitt foreslått for utpakking brasilianske propolis^19</s…

Materials

ethanol	Sigma-Aldrich	E7023
Whatman no. 4 filter paper	Sigma-Aldrich	WHA1004125
methanol	Sigma-Aldrich	34860
reverse phase RP-18 column	Phenomenex Inc.	00G-0234-E0
Staphylococcus aureus	ATCC	BCRC 10780
Escherichia coli	ATCC	BCRC 10675
tryptic soy broth	Sigma-Aldrich	22092
nutrient broth	Sigma-Aldrich	70122
dimethyl sulfoxide	Sigma-Aldrich	D2650
spice grinder	Waring	WSG60K
microplate Reader	Molecular Devices	EMAX PLUS
HPLC system	Agilent	1200 Series
vacuum evaporation	BÜCHI	Rotavapor R-215